[發明專利]一種梅花染色體周年性制片方法

有效

• 申請號: 201210146739.4
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN102768131A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發明（設計）人: 張啟翔;陳晶鑫;楊煒茹;孫麗丹
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.一種梅花染色體周年性制片方法，其特征在于，根據時間選取如下分生組織作為制片材料：

1)春季，梅花早春枝條新發莖尖；2)初夏，梅花未成熟胚，以及梅花未成熟胚組織培養所得生長點；3)夏、秋，梅花一年生實生苗頂端生長點；4)冬季，梅花休眠枝條水培所得莖尖。

2.根據權利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花早春枝條新發莖尖，為梅花葉芽正常萌動伸長時，剝去鱗片及大葉，所取得的萌發莖尖。

3.根據權利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花未成熟胚，為授粉后25～35天，用石錘除去梅花果實的果肉，打開果核取出種子，所取的未成熟胚。

4.根據權利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花未成熟胚組織培養所得生長點，為以6-BA濃度是1mg/L、IBA濃度是0.2mg/L的MS培養基進行梅花組織培養，暗培養一周，胚伸長時，切取的0.5cm伸長部位作為梅花未成熟胚組織培養所得生長點。

5.根據權利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花一年生實生苗頂端生長點，為于第一年8月初對梅花種子進行2℃低溫沙藏，55-65天后梅花種子發芽，播種栽培于溫室，次年4月中旬移栽至大田，同時對梅花一年生實生苗進行修剪，待分枝后，于上午切取一年生枝條頂端生長點作為梅花一年生實生苗頂端生長點。

6.根據權利要求5所述的制片方法，其特征在于，切取梅花一年生枝條頂端生長點的時間為上午9:00～11:00。

7.根據權利要求1所述的制片方法，其特征在于，所述的梅花休眠枝條水培所得莖尖，為于11月中旬取一年生枝條蠟封處理，4℃低溫保存一個月后水培，一周后發芽，所取的萌發莖尖。

8.根據權利要求1-7所述的制片方法，其特征在于，包含以下步驟：

(1)所取制片材料用卡諾固定液低溫4℃固定20h以上，作為固定后的材料待用；

(2)配制纖維素酶和果膠酶的酶溶液，纖維素酶的重量百分含量為2.0～2.5％，果膠酶的重量百分含量為2.0～2.5％；

(3)將步驟(1)中固定后的材料用步驟(2)配制的纖維素酶和果膠酶的酶溶液常溫酶解，酶解時間長度90～150min，作為酶解后的材料待用；

(4)將酶解后的材料進行染色壓片法制片。

9.根據權利要求8所述的制片方法，其特征在于，步驟(2)所述的纖維素酶和果膠酶的酶溶液，纖維素酶的重量百分含量為2.38％，果膠酶的重量百分含量為2.38％。

10.根據權利要求8所述的制片方法，其特征在于，步驟(3)所述用纖維素酶和果膠酶的酶溶液常溫酶解，酶解溫度為37℃，酶解時間長度為110min。