[發明專利]尿肌氨酸及肌酐測定試劑盒

無效

• 申請號: 201210145532.5
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN102680599A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 章開程;葉軍;胡英偉;林益華;李軍艷
• 申請（專利權）人: 上海特敏生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 俞宗耀;俞昉

1.一種尿肌氨酸和肌酐測定試劑盒，其特征在于組成包括：?

1）對照品：肌氨酸濃度分別為100-300μg/L、1000-3000μg?/L、5000-8000μg?/L和肌酐濃度分別為100-300mg/L、1000-3000mg/L、5000-8000mg/L的化學品；

2）質控品：肌氨酸濃度為800-1000μg?/L?和肌酐濃度為800-1000mg/L的化學品；

3）內標溶液：肌氨酸-d3?50-100mg/L，肌酐-d3?150-200?mg/L的化學品；

4）沉淀劑：乙腈；

5）流動相A：含0.1?mmol/L甲酸銨和0.4%甲酸的20%乙腈水溶液；

6）流動相B：含0.02%甲酸的20%乙腈水溶液。

2.權利要求1所述試劑盒用于尿中肌氨酸和肌酐測定的方法，其特征在于步驟為：

1）標準曲線的繪制:用對照品和內標的比值繪制標準曲線，用質控品和內標的比值確認標準曲線；

2）尿樣采集：隨機尿，3000rpm離心5min，取上清尿2mL左右-20℃保存，臨用前于室溫下解凍；

3）樣品稀釋處理：尿樣中以乙腈∶尿樣體積比為2∶1的比例加入沉淀劑乙腈，除去尿樣中蛋白，并稀釋尿樣至肌氨酸濃度為100-5000μg/L，肌酐濃度為100-5000mg/L；

4）色譜分離純化：以硅膠鍵合相填料為色譜柱，用流動相A和／或流動相B等度或者梯度洗脫，使肌氨酸和肌酐與其他干擾物質色譜分離；

5）質譜檢測：經液相色譜儀分離后的肌氨酸和肌酐，采用電噴霧離子化串聯質譜儀，在正離子檢測模式下，檢測肌氨酸和肌酐；肌氨酸的母離子，其質量電荷比m/z為90±0.5；經過進一步質譜碎裂后同時檢測肌氨酸的母離子和碎片離子，其質量電荷比m/z分別為90±0.5和44±0.5；肌酐的母離子，其質量電荷比m/z為114±0.5；經過進一步質譜碎裂后同時檢測肌酐的母離子和碎片離子，其質量電荷比m/z分別為114±0.5和86±0.5；

6）結果計算：以肌氨酸和肌酐質譜檢測獲得的峰面積與內標峰面積的比值，計算肌氨酸或肌酐的濃度值。

3.根據權利要求2所述測定方法，其特征在于步驟4）所述肌氨酸與其他干擾物質色譜分離的條件是：色譜柱：?HYPERSIL?silica，5μm，?2.1×100mm，Thermo，流動相B：含0.02%甲酸的?20%乙腈溶液，流速：0.3mL/min，進樣量：5μL。

4.根據權利要求2所述測定方法，其特征在于步驟4）所述肌酐與其他干擾物質色譜分離的條件是：色譜柱：HYPERSIL?silica，5μm，?2.1×100mm，Thermo?，流動相A?：含?0.1?mmol/L甲酸銨和?0.4%甲酸的?20%乙腈溶液，流動相B：含?0.02%甲酸的?20%乙腈溶液，梯度洗脫，0～0.1?min、0.1～2?min、?2.1～6?min，流動相A∶流動相B體積百分比分別為25％∶75％、100％∶0％、25％∶75％，流速：0.3mL/min，進樣量：3μL。

5.根據權利要求2所述測定方法，其特征在于步驟5）所述肌氨酸質譜檢測條件為：電噴霧離子源，?正離子掃描；MRM掃描，肌氨酸檢測通道90.1>44.1，±0.5?m/z，肌氨酸-d3檢測通道93.1>47.1?，±0.5?m/z，離子化電壓：5000V；離子化溫度：550℃；噴霧氣：60?psi；加熱氣：60?psi；氣簾氣：25?psi；碰撞氣：中等；去簇電壓（DP）：21?V；入口電壓（EP）：4?V；碰撞能（CE）：20?V；出口電壓（CXP）：6?V。

6.根據權利要求2所述測定方法，其特征在于所述步驟5）肌酐質譜檢測條件為：電噴霧離子源，正離子掃描；MRM掃描，肌酐檢測通道114.8>86.1，±0.5?m/z，肌酐-d3檢測通道117.1>89.1??±0.5?m/z??，離子化電壓：5000V；離子化溫度：550℃；噴霧氣：60?psi；加熱氣：60?psi；氣簾氣：25?psi；碰撞氣：中等；去簇電壓（DP）：26?V；入口電壓（EP）：7?V；碰撞能（CE）：18?V；出口電壓（CXP）：5?V。