[發明專利]尿肌氨酸及肌酐測定試劑盒

無效

• 申請號: 201210145532.5
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN102680599A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 章開程;葉軍;胡英偉;林益華;李軍艷
• 申請（專利權）人: 上海特敏生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 俞宗耀;俞昉

技術領域

本發明涉及醫藥檢測技術領域，具體涉及尿中肌氨酸和肌酐測定試劑盒。

背景技術

通過檢測生物樣本中小分子或者大分子標志物是疾病篩查與診斷的有效手段，對于疾病的早期診斷、治療和預后具有重要的參考價值和臨床意義。肌氨酸（N－甲基甘氨酸,?sarcosine）是一種存在于人體肌肉和其他組織的天然氨基酸，為甘氨酸的代謝產物。研究表明，肌氨酸在侵襲性前列腺癌中含量顯著升高，且肌氨酸可在尿樣中檢測出來，這一發現使得肌氨酸成為前列腺癌非損傷性診斷的一個候選生物標記，也有可能成為更優的新型的前列腺癌進展標志物。尿中肌酐的排泄量較少受尿液濃縮和稀釋的影響,故尿中肌酐濃度的測定常用作尿中其他物質排泄濃度的參照物。在本試劑盒中肌酐作為肌氨酸的參照物在同一份樣品中同時測定，校正了樣品中肌氨酸的濃度，降低了對臨床樣品的要求。目前對于肌氨酸和肌酐的檢測，分別采用氣相色譜－質譜法和化學法，它們的主要缺陷是特異性和靈敏度低，方法比較復雜。

液相色譜－同位素稀釋質譜法，屬于非損傷性檢測方法，是近年來獲得迅速發展的分析測試技術，在體內藥物分析、臨床生化和新生兒遺傳性代謝疾病篩選等領域已有廣泛應用。它具有高度特異性、靈敏度和準確性的特點，且成本低廉，簡單、快速，已成為臨床科研中檢測量值的基準方法之一。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種操作簡便、專一靈敏的尿中肌氨酸濃度的定量檢測法及配套試劑盒，以滿足開展大規模臨床前列腺癌研究的需要。

本發明公開的尿肌氨酸和肌酐測定試劑盒的組成包括：?

1）對照品：肌氨酸濃度分別為100-300μg/L、1000-3000μg?/L、5000-8000μg?/L和肌酐濃度分別為100-300mg/L、1000-3000mg/L、5000-8000mg/L的化學品；

2）質控品：肌氨酸濃度為800-1000μg?/L?和肌酐濃度為800-1000mg/L的化學品；

3）內標溶液：肌氨酸-d3?50-100mg/L，肌酐-d3?150-200?mg/L的化學品；

4）沉淀劑：乙腈；

5）流動相A：含0.1?mmol/L甲酸銨和0.4%甲酸的20%乙腈水溶液；

6）流動相B：含0.02%甲酸和20%乙腈的水溶液。

采用所述試劑盒進行尿中肌氨酸和肌酐測定方法，其特征在于步驟為：

1）標準曲線的繪制:用對照品和內標的比值繪制標準曲線，用質控品和內標的比值確認標準曲線；

2）尿樣采集：隨機尿，3000rpm離心5min，取上清尿2?mL左右-20℃保存，臨用前于室溫下解凍；

3）樣品稀釋處理：尿樣中以乙腈∶尿樣體積比為2∶1的比例加入沉淀劑乙腈，除去尿樣中蛋白，并稀釋尿樣至肌氨酸濃度為100-5000μg/L，肌酐濃度為100-5000mg/L；

4）色譜分離純化：?以硅膠鍵合相填料為色譜柱，流動相A和流動相B采用等度或者梯度洗脫，將肌氨酸和肌酐從色譜柱上洗脫，與其他干擾物質色譜分離；

5）質譜檢測：經液相色譜儀分離純化的肌氨酸和肌酐，采用電噴霧離子化串聯質譜儀，在正離子檢測模式下，檢測肌氨酸和肌酐；肌氨酸的母離子，其質量電荷比m/z為90±0.5；經過進一步質譜碎裂后同時檢測肌氨酸的母離子和碎片離子，其質量電荷比m/z分別為90±0.5和44±0.5；肌酐的母離子，其質量電荷比m/z為114±0.5；經過進一步質譜碎裂后同時檢測肌酐的母離子和碎片離子，其質量電荷比m/z分別為114±0.5和86±0.5；

6）結果計算：以肌氨酸和肌酐質譜檢測獲得的峰面積與內標峰面積的比值，代入標準曲線回歸方程，根據公式y?=a+bx計算即可得到肌氨酸或肌酐的濃度值。其中，Y為肌氨酸或肌酐與內標峰面積比值，x為肌氨酸或肌酐的濃度值。

所述步驟4）中：?HYPERSIL?silica，5μm，?2.1×100mm，Thermo，流動相B：含0.02%甲酸的?20%乙腈溶液，等度洗脫，流速：0.3mL/min，進樣量：5μL。