[發(fā)明專利]通過(guò)定向進(jìn)化構(gòu)建的熱穩(wěn)定性提高的脂肪酶突變體

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210145503.9
• 申請(qǐng)日: 2010-08-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102653743A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 喻曉蔚;徐巖;王睿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/20
• 分類號(hào): C12N9/20;C12N15/55;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84
• 代理公司: 無(wú)錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所 32104
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

1.通過(guò)定向進(jìn)化構(gòu)建的熱穩(wěn)定性提高的脂肪酶突變體，其特征在于由親本華根霉（Rhizopus??chinensis?）CCTCC?NO：M?201021脂肪酶進(jìn)行定向進(jìn)化，通過(guò)易錯(cuò)PCR、DNA?Shuffling和定點(diǎn)突變，獲得脂肪酶突變體，親本華根霉氨基酸序列SEQ?ID?NO:?1中在氨基酸取代位置發(fā)生突變，采用“原始氨基酸-位置-替換的氨基酸”來(lái)表示脂肪酶突變體中突變的氨基酸，所述脂肪酶突變體為：

脂肪酶突變體????氨基酸取代位置

突變體10????Ser234Phe/Leu180His/Thr218Ser

華根霉脂肪酶氨基酸突變體的氨基酸序列為SEQ?ID?NO:?2；

用于表達(dá)所述的脂肪酶突變體的表達(dá)載體為：pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα，pPICZ；

用于所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的微生物宿主細(xì)胞為畢赤酵母。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酶突變體，其特征在于與親本華根霉脂肪酶相比，所述脂肪酶突變體的熱穩(wěn)定性獲得了提高，以在65℃下的半衰期t₅₀來(lái)表示熱穩(wěn)定性的提高，所述脂肪酶突變體的半衰期以及提高的倍數(shù)如下：?

脂肪酶突變體????氨基酸取代位置???????65℃?t50(min)????65℃?t50(min)?提高倍數(shù)

突變體10????????Ser234Phe/Leu180His/Thr218Ser???????????89.9?????????5.45

親本華根霉脂肪酶在65℃下的半衰期t₅₀為16.5?min。