[發明專利]NICD基因的新應用以及一種提高真核細胞抗CVB感染能力的方法及藥物

無效

• 申請號: 201210144497.5
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN103386137A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 陳惠鵬;凌焱;孫芳;李玉霞;劉剛;張小男;湯潔;毛艷;賈天野
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61P31/14;C12N5/00;C12N5/09
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明屬于生物學領域，涉及基因的新功用以及利用其提高宿主細胞抗感染的方法，特別是涉及一種提高真核細胞抗感染程度的方法以及該方法中所用基因、重組DNA質粒及其轉染細胞在制備預防和治療CVB病毒感染的藥物中的應用。

背景技術

柯薩奇病毒(Coxsackie?Virus)是非常嚴重的人類疾病的致病病原，它的感染可以造成廣泛的疾病，從較輕的呼吸道感染癥狀，到比較嚴重的心肌炎及神經系統的疾病。其中，柯薩奇B組病毒所致感染的發生率很高，柯薩奇病毒B3與急性心肌炎、慢性心肌炎、胰腺炎以及胰島素依賴型糖尿病的發生均有很大關系。

柯薩奇病毒為微小的單股核糖核酸(RNA)病毒，屬腸道病毒，為立體對稱20面體，直徑20～30nm，外有衣殼，無囊膜。該病毒分兩群30個型，A群分為1～24型，B群分為1～6型，各群病毒的若干型之間有不同程度的抗原交叉反應。該病毒有時亦寄居在人的腸道內，對外界抵抗力較強，但對紫外線和干燥較敏感。

柯薩奇病毒主要從病人、隱性感染及健康帶病毒者的糞便排出體外，在發病2周內排毒量最高；其次，也可從鼻咽分泌物排出，通過密切接觸及糞-口途徑為主要傳播方式，呼吸傳播次之；母嬰宮內經胎盤傳播也有可能，易感性普遍。感染人類后，進一步形成病毒血癥，主要靶器官是腦膜、心臟、皮膚、肌肉等，但體內任何臟器均可受累，臨床表現復雜多樣。

除多種較經典臨床綜合征表現外，柯薩奇病毒已成為支氣管肺炎的重要病原，發病人群以小兒為多，病后對同型病毒有持久的免疫力。隨著B組柯薩奇病毒(CVB)病原學檢測的廣泛應用，CVB感染在兒科疾病中的地位日顯重要。

柯薩奇病毒感染分布世界各地，除散發和小規模流行外，還常有爆發流行。嚴重的暴發流行，其病死率曾高達69.4％，對新生兒危害較大，已引起世界范圍新生兒學者重視。所以對于CVB病毒本身的特點、感染機制及病毒感染細胞后細胞內信號傳導通路的研究就顯得十分重要。這些不僅可以幫助我們了解CVB病毒感染機制這一課題，同時也有助于我們防治CVB病毒的感染病，由此針對性的開發防治的手段和藥物。

近來研究發現，細胞內信號傳導通路在CVB對宿主細胞的損傷過程中起重要作用。例如，MAPK信號通路在CVB3感染過程中起關鍵作用，同樣在CVB3誘導的心肌炎的發病中也起重要作用。CVB3感染宿主細胞后可出現PI-3K/Akt通路的活化調節病毒復制，同時能減少病毒感染引起宿主細胞的凋亡。CVB3感染激活NF-κB，通過調節各種促炎因子的水平影響病毒對心肌細胞的損傷。泛素/蛋白酶體信號通路也參與CVB病毒感染過程。Honglin?Luo等人在體外培養的心肌細胞中發現，CVB3誘導的細胞病變作用和細胞死亡能被蛋白酶抑制劑所阻斷，且心肌細胞內病毒滴度亦下降。蛋白酶體抑制劑減弱CVB3的侵襲力、拮抗凋亡的作用可能是通過抑制病毒RNA的復制和蛋白翻譯而實現。還有研究發現四氫吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽能減少CVB3的復制，其作用是通過抑制泛素/蛋白酶體信號通路而實現的（Honglin?L，Zhang?J?C，Caroline?C，et?al.Proteasome?inhibition?reduces?coxsackievirus?B3?replication?in?murine?cardiomyocytes.Am?Pathol?2003，163:381-385.）。JAK/STAT信號途徑在病毒感染中也起著重要作用，登革熱病毒2型可通過下調人樹突狀細胞中Tyk2-STAT信號通路拮抗IFN-α的抗病毒作用。IFN-γ的抗病毒作用也是通過JAK/STAT信號通路起作用的。CVB3感染的心肌細胞中p-STAT3的表達明顯增高，抑制STAT3（轉錄活化子3）活性能使體外培養的心肌細胞中病毒RNA的表達減弱，細胞存活力增高。

所以，對病毒感染后細胞中信號通路的變化以及可以影響病毒感染的細胞中相關信號通路的研究，有助于了解病毒的感染機制和致病機制，也可以為抗病毒藥物的研發提供新的可選擇的靶點。