[發(fā)明專利]醋糟基質(zhì)栽培中菌根真菌與拮抗菌聯(lián)用抗枯萎病的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210144414.2
• 申請日: 2012-05-11
• 公開（公告）號: CN102652487A
• 公開（公告）日: 2012-09-05
• 發(fā)明（設計）人: 肖翔;林英;司春燦;杜道林;戴志聰;曹丹鳴;王莉莉;王明娜
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇大學
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種將菌根真菌及拮抗菌聯(lián)用提高醋糟基質(zhì)栽培作物抵抗土傳病原真菌枯萎病的方法，屬于資源利用領(lǐng)域、農(nóng)業(yè)領(lǐng)域和生物農(nóng)藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

設施栽培環(huán)境是一種特殊的生態(tài)系統(tǒng)，其低溫、高濕、弱光的特點為真菌病害的發(fā)生提供了適宜的環(huán)境條件。另外，由于受到條件限制，連作會造成土壤營養(yǎng)失衡，使得有益微生物種群下降，為土傳病害的發(fā)生提供了穩(wěn)定的棲息場所，有利于病原菌累積。雖然，無土栽培在一定程度上能緩解設施栽培環(huán)境下土壤的生態(tài)環(huán)境惡化問題，但仍然無法完全避免基質(zhì)中作物根系受到有害微生物的侵染。這是因為一方面，病原微生物侵入基質(zhì)的來源無法完全杜絕，如生產(chǎn)過程中的灌水、空氣等的污染，以及作物輪作少，栽培管理中的人為污染都可能導致病原微生物的入侵。另一方面，基質(zhì)微生物區(qū)系缺少多樣性，如果一種病原菌侵入基質(zhì)，由于沒有其它更多的微生物與之競爭和拮抗，病原菌會迅速在基質(zhì)中穩(wěn)定生長并引起嚴重病害。

無土栽培分為無基質(zhì)栽培和基質(zhì)栽培兩類。茄果類蔬菜采用基質(zhì)栽培，常用的基質(zhì)有草炭、鋸末、稻殼、砂、陶粒、巖棉、珍珠巖和蛭石等。草炭和蛭石混合的基質(zhì)栽培番茄和黃瓜類蔬菜效果很好

因此無土基質(zhì)栽培雖然能在一定程度上緩解設施栽培環(huán)境下土壤的生態(tài)環(huán)境惡化問題，但其同樣也存在著嚴重的連作障礙。目前對基質(zhì)栽培連作障礙的根除，采取的常用辦法是更換新的基質(zhì)，這無疑會加重生產(chǎn)成本和工作量。雖然醋糟基質(zhì)已經(jīng)作為一種優(yōu)良的物質(zhì)栽培基質(zhì)而被廣泛使用，但是已有的研究結(jié)果表明，醋糟基質(zhì)連作2到3年雖然能仍保持較好的肥力，但連作2到3年的醋糟基質(zhì)也開始出現(xiàn)真菌病害，使得其不得不更換，造成了很大的浪費。因此，如何抑制連作中醋糟基質(zhì)的真菌病原病害，提高基質(zhì)的利用率，已經(jīng)成為目前亟待改進的一個實際問題。

菌根真菌是植物根圍微生物區(qū)系最重要的成員之一，分布十分廣泛，與農(nóng)業(yè)生產(chǎn)關(guān)系密切。菌根真菌與植物根系建立最密切的互惠共生體的同時，能與其他根際微生物如細菌、放線菌、其他真菌、線蟲等相互作用，從而影響土壤和植物的健康狀況。越來越多的試驗表明，菌根真菌真菌能夠促進植物生長，改善植物健康狀況，增強植物對生物和非生物脅迫的抗性。芽孢桿菌Bacillus?spp.?JSB-1是一株植物真菌病害拮抗菌。該菌對多種植物病原菌都具有明顯的拮抗作用。因此，本發(fā)明針對醋糟基質(zhì)連作中黃瓜枯萎病的發(fā)生，將菌根真菌和芽孢桿菌生防菌株聯(lián)用同時接種于栽培作物的醋糟基質(zhì)，提高作物對真菌病原枯萎病的抵抗能力，延長醋糟的使用壽命。

?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對醋糟基質(zhì)連作栽培經(jīng)常出現(xiàn)的真菌病原枯萎病的問題，通過在醋糟中添加菌根真菌和芽孢桿菌Bacillus?spp.?JSB-1，從而提高作物對枯萎病的抵抗能力，抑制枯萎病的發(fā)生，延長醋糟的使用壽命。

本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

菌根真菌及拮抗菌聯(lián)用提高醋糟基質(zhì)栽培抗黃瓜枯萎病的方法，按照下述步驟進行：

一、抗性菌劑芽孢桿菌的制備：

（1）?配置固體平板酵母膏蛋白胨培養(yǎng)基，于30℃?下培養(yǎng)對芽孢桿菌生防菌株進行活化；

（2）將活化的菌體接種于含有2/5?酵母膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的三角瓶中，30℃、200?rpm搖至對數(shù)期，取對數(shù)期菌液，7000?rpm離心?10min，取沉淀，加水將細菌重懸浮液調(diào)成l×10⁸CFU/?ml。

二、菌根真菌菌劑的制備：

（1）將菌根真菌Glomus?intraradices無菌體系，用10?mM檸檬酸鈉溶液以1:?10?(v:?v)的體積混合溶解其中的植物凝膠，然后將提取其中的菌根真菌孢子。

（2）將上步獲得的真菌孢子，接種到泥：沙為1：3?(v：v)混合的滅菌的土壤中，澆水后播種玉米作為共生作物，覆土100g，常規(guī)培養(yǎng)3個月后，獲得大量的菌根真菌菌劑。

三、菌根真菌及拮抗菌聯(lián)用雙接種連作的醋糟基質(zhì)：

（1）用質(zhì)量比為2：1：1的新鮮醋糟：蛭石：草炭混合配置的育苗基質(zhì)，進行常規(guī)穴盤育苗。

（2）將上述步驟一和二中分別制取得到的抗性菌劑芽孢桿菌和菌根真菌，分別按不同的比例添加到連作3年的醋糟基質(zhì)中，其中菌根真菌按醋糟基質(zhì)的質(zhì)量比為3%添加，拮抗菌按保證醋糟中含有l(wèi)×10⁵CFU/?g的菌體密度添加，將添加的菌根真菌和拮抗菌與醋糟基質(zhì)充分混勻。