[發(fā)明專利]一種轉(zhuǎn)基因玉米檢測(cè)用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210144243.3
• 申請(qǐng)日: 2012-05-10
• 公開（公告）號(hào): CN102676674A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于常海;劉樂庭;楊濱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 海康生物科技（北京）有限公司;北京大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/63;C12N15/66
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 馮瓊;姜義民

1.一種轉(zhuǎn)基因玉米BT176檢測(cè)用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子，其特征在于，將玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因zSSIIb特異性序列、轉(zhuǎn)基因玉米BT176的構(gòu)建特異性序列依次構(gòu)建到質(zhì)粒載體中而得；所述玉米內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)基因zSSIIb特異性序列如SEQ?ID?No.1所示，所述轉(zhuǎn)基因玉米BT176的構(gòu)建特異性序列如SEQ?ID?No.2所示。

2.如權(quán)利要求1所述的質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子，其特征在于，所述質(zhì)粒載體為pEASY-T3載體。

3.如權(quán)利要求1所述質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子的制備方法，其特征在于，將SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列和SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列經(jīng)重疊PCR法連接起來，并將連接產(chǎn)物構(gòu)建到質(zhì)粒載體上，獲得權(quán)利要求1所述質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子。

4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列由SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示序列組成的引物對(duì)，擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因玉米BT176陽性標(biāo)準(zhǔn)品而得。

5.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列由SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示序列組成的引物對(duì)，擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因玉米BT176陽性標(biāo)準(zhǔn)品而得。

6.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述質(zhì)粒載體為pEASY-T3載體。

7.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其具體步驟如下：

（1）由SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.4所示序列組成的引物對(duì)，擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因玉米BT176陽性標(biāo)準(zhǔn)品，得SEQ?ID?No.1所示核苷酸序列的擴(kuò)蹭產(chǎn)物；

（2）由SEQ?ID?No.5和SEQ?ID?No.6所示序列組成的引物對(duì)，擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因玉米BT176陽性標(biāo)準(zhǔn)品，得SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列的擴(kuò)蹭產(chǎn)物；

（3）以SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列為模板進(jìn)行重疊PCR擴(kuò)增，得到SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列的連接產(chǎn)物；

（4）將上述連接產(chǎn)物構(gòu)建到質(zhì)粒載體上得到權(quán)利要求1所述轉(zhuǎn)基因玉米BT176檢測(cè)用質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)分子。

8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述重疊PCR的引物對(duì)序列如SEQ?ID?No.3和SEQ?ID?No.6所示。

9.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）和步驟(2）還包括對(duì)所得擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行鑒定的步驟，其具體步驟如下：將所得擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建到質(zhì)粒載體上，獲得含有該擴(kuò)增產(chǎn)物的中間質(zhì)粒分子；將上述中間質(zhì)粒分子轉(zhuǎn)化感受態(tài)菌株、測(cè)序鑒定；對(duì)測(cè)序正確的中間質(zhì)粒分子進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以獲得SEQ?ID?No.1或SEQ?ID?No.2所示核苷酸序列的擴(kuò)增產(chǎn)物。