[發(fā)明專利]一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210143785.9
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102657087A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發(fā)明（設計）人: 徐文華;周國英;劉衛(wèi)根;楊路存;賀麗華;李春麗
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

技術領域

本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)和離體快速繁殖，尤其涉及一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法。

背景技術

羌活是傘形科（Umbelliferae）羌活屬（Notopterygium）多年生植物，為我國特有的重要瀕危植物，是中、藏、羌藥中最常用的藥材之一，也是市場缺口較大的中藏藥材。羌活以根狀莖及根入藥，味辛、性溫，有散表寒、祛風濕利關節(jié)等功效，主治感冒風濕、發(fā)熱頭痛、皮膚瘙癢、風水浮腫等癥。我國歷版藥典對羌活均有收載，據(jù)《中華人民共和國藥典》2005年版一部，為傘形科（Umbelliferae）多年生草本植物羌活（Notopterygium?incisum?Ting?ex?H.T.?Chang）和寬葉羌活（N.?forbesii?Boissieu）的干燥根莖及根，用藥開發(fā)歷史悠久。依據(jù)藥材性狀一般劃分為蠶羌、竹節(jié)羌、大頭羌和條羌4個商品等級。按產(chǎn)地不同分為川羌（四川）和西羌（青海、甘肅等）。青海是羌活藥材的道地產(chǎn)區(qū)，暢銷全國并出口，主產(chǎn)果洛、玉樹、黃南、海東等地2800米以上的高海拔山區(qū)。

羌活藥材長期依賴野生采挖來滿足國內(nèi)外市場需求，種質(zhì)資源破壞嚴重、蘊藏量急劇減少，羌活種群遭到了毀滅性破壞，致使其資源已無法滿足市場需要。尤其是近年來隨著國內(nèi)外對羌活需求量的增加，供需矛盾日益突出，加之利益驅(qū)使，大量掠奪性采挖，使羌活逐漸成為瀕危植物，面臨物種喪失，資源枯竭的危險，進行種質(zhì)資源保護和擴大羌活繁育勢在必行。

植物組織培養(yǎng)技術是利用細胞的全能性（即個體的某個器官或組織已經(jīng)分化的細胞再生成完整個體的遺傳潛力。），取植物個體上的細胞團或組織，通過人工配制的培養(yǎng)基，使這些細胞團或組織形成成千上萬個植株。利用組織培養(yǎng)進行離體快速繁殖有以下幾方面重要意義：⑴繁殖速度快，不受外界氣候因素影響，一年四季在室內(nèi)均可快速大量繁殖；⑵便于保持優(yōu)良生物學特性；⑶在保存和繁育優(yōu)良突變體或優(yōu)良雜種一代方面有非常重要的意義，一株具有明顯優(yōu)勢的羌活突變體或一個具明顯優(yōu)勢的后代經(jīng)組織培養(yǎng)后可大面積推廣等等。

文獻報道了眾多高山野生藥材的組織培養(yǎng)，如雪蓮、紅景天等，但以野生羌活幼葉為外植體的組織培養(yǎng)尚未見報道。從野外采集的外植體，其表面滋生大量細菌和真菌等微生物，有的甚至長到組織內(nèi)部；加之羌活所含醌類、酚類物質(zhì)較多，很容易氧化褐變，因此對外植體材料的選擇和消毒處理方法都是非常關鍵。本發(fā)明首次采用幼葉外植體組織培養(yǎng)方法，開展野生羌活種質(zhì)離體繁殖研究工作，這為挽救珍稀瀕危羌活種質(zhì)資源，開展遺傳改良、促進羌活的工廠化育苗提供了一條新途徑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種易于操作、可進行大規(guī)模工廠化生產(chǎn)的羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法。

為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種羌活組織培養(yǎng)離體快速繁殖方法，包括以下步驟：

⑴外植體的選擇和消毒處理：以羌活的幼葉為外植體，經(jīng)流水沖洗10~20分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌15~30秒，然后以無菌去離子水沖洗2~3次，再將沖洗后的外植體置于質(zhì)量濃度為0.1%~0.2%的升汞中，浸泡滅菌5~8分鐘，并用無菌去離子水沖洗3~6次，即得消毒后的外植體；

⑵外植體接種：將所述消毒后的外植體切成0.1~0.5cm²的小塊，接種在愈傷組織誘導培養(yǎng)基上，其中每25ml所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基中接種3小塊所述消毒后的外植體；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強為30~60?umol?.?m^-2.?s^-1、光照時間為12?h?.d^-1的條件下培養(yǎng)10~25天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織；

⑶愈傷組織增殖：將所述愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養(yǎng)基上，其中每25ml所述愈傷組織增殖培養(yǎng)基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強為30~60?umol?.?m^-2.?s^-1、光照時間為12?h?.d^-1的條件下愈傷組織增殖20~35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織；