[發明專利]一種羌活組織培養離體快速繁殖方法

無效

• 申請號: 201210143785.9
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102657087A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 徐文華;周國英;劉衛根;楊路存;賀麗華;李春麗
• 申請（專利權）人: 中國科學院西北高原生物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 李艷華

1.一種羌活組織培養離體快速繁殖方法，包括以下步驟：

⑴外植體的選擇和消毒處理：以羌活的幼葉為外植體，經流水沖洗10~20分鐘，再用體積濃度為75%的酒精浸泡滅菌15~30秒，然后以無菌去離子水沖洗2~3次，再將沖洗后的外植體置于質量濃度為0.1%~0.2%的升汞中，浸泡滅菌5~8分鐘，并用無菌去離子水沖洗3~6次，即得消毒后的外植體；

⑵外植體接種：將所述消毒后的外植體切成0.1~0.5cm²的小塊，接種在愈傷組織誘導培養基上，其中每25ml所述愈傷組織誘導培養基中接種3小塊所述消毒后的外植體；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強為30~60?umol?.?m^-2.?s^-1、光照時間為12?h?.d^-1的條件下培養10~25天，在幼葉切口處膨大形成愈傷組織；

⑶愈傷組織增殖：將所述愈傷組織接種到愈傷組織增殖培養基上，其中每25ml所述愈傷組織增殖培養基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強為30~60?umol?.?m^-2.?s^-1、光照時間為12?h?.d^-1的條件下愈傷組織增殖20~35天，長出乳白色、顆粒狀致密性的愈傷組織；

⑷愈傷組織的芽誘導：將所述步驟⑶所得到的愈傷組織接種到誘芽培養基上，其中每25ml所述誘芽培養基中接種2塊所述愈傷組織；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強為30~60?umol?.?m^-2.?s^-1、光照時間為12?h?.d^-1的條件下培養30~35天，形成叢生羌活苗；

⑸生根誘導：將所述叢生羌活苗分株后轉入生根培養基中，其中每25ml所述生根培養基中接種1棵所述叢生羌活苗；在溫度為20℃±2℃、光源為日光燈、光強為30~60?umol?.?m^-2.?s^-1、光照時間為12?h?.d^-1的條件下培養20~30天后，小苗基部出現白色、粗壯短根，并長出完整根系，即得完整再生小苗；

⑹育苗基質消毒：將育苗基質在115~121℃溫度下進行高溫消毒，15~20min后即得消毒后的育苗基質；所述育苗基質是指腐殖質與珍珠巖按2：1重量比混合而成的混合基質；

⑺植株移栽：將所述完整再生小苗直接移栽到所述消毒后的育苗基質中，煉苗后即長成正常羌活植株；所述一棵完整再生小苗種植在所述消毒后的育苗基質10cm²的范圍內。

2.如權利要求1所述的一種羌活組織培養離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑴中的羌活的基源植物為傘形科多年生草本植物羌活。

3.如權利要求1所述的一種羌活組織培養離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑵中的愈傷組織誘導培養基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0.1mg/ml的2,4-二氯苯氧乙酸母液5~20ml，濃度為0.1mg/ml的萘乙酸母液2~10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入1mM?NaOH溶液調整pH值至5.8，最后加入瓊脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經121℃高溫消毒即得。

4.如權利要求1所述的一種羌活組織培養離體快速繁殖方法，其特征在于：所述步驟⑶中的愈傷組織增殖培養基是指在1000ml的燒杯中，依次加入大量元素母液100ml，微量元素母液10ml，有機成分母液10ml，鐵鹽母液5ml，檸檬酸母液4ml，Vc母液2ml，蔗糖30克，濃度為0.1mg/ml的2,4-二氯苯氧乙酸母液10~15ml，濃度為0.1mg/ml的萘乙酸母液5~10ml，后加雙蒸餾水至1000ml刻度處，攪勻后，加入1mM?NaOH溶液調整pH值至5.8，最后加入瓊脂粉6.0~8.0克，在100ml三角瓶中每25ml分裝為一瓶，經121℃高溫消毒即得。