[發明專利]火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法

有效

• 申請號: 201210143699.8
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102636592A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 郗存顯;唐柏彬;李賢良;王國民;張雷;李應國;鄭小玲;張進忠
• 申請（專利權）人: 重慶出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/88
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

技術領域

本發明屬于化學分析檢測領域，具體涉及火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法。

背景技術

火鍋底料是由牛油、辣椒、花椒、蔥、姜、蒜和香辛料等幾十種材料混合熬制而成的一種固體復合調味料。色澤鮮紅是火鍋的一大特點，其主要成色物質來自辣椒中的辣椒紅色素等天然色素，但也有不法商家為了降低成本、改善賣相，在制作過程中加入各種人工合成色素。人工合成色素通常以苯及其同系物為原料，經過磺化、硝化、鹵化和偶氮化等一系列有機反應制得。毒理學研究發現，有些合成色素有慢性毒性或致癌性，各國都嚴格控制其使用范圍和使用量。

鑒于合成色素對人體的危害性，世界各國對合成食用色素的使用種類、使用量和允許使用的食品均有明確規定。日本允許使用的合成色素有莧菜紅、藻紅、誘惑紅、胭脂紅、焰紅、孟加拉紅、桔紅、檸檬黃、日落黃、不退綠FCF或它的銀紅、亮藍，共11種；美國允許使用的有阿洛拉紅、亮藍、赤蘚紅、橘紅2號、堅固綠、靛藍、立索玉紅、日落黃、檸檬黃和橙色B等；歐盟允許使用的有酸性黃、檸檬黃、喹啉黃、日落黃FCF、胭脂紅、偶氮玉紅、莧菜紅、麗春紅4R、赤蘚紅、紅色2G、誘惑紅AC、專利藍V、靛藍、亮藍FCF、亮黑BN、棕色FK、棕色HT、立索爾寶紅BK等。截止1998年底，我國批準允許使用的合成色素有覓菜紅、覓菜紅鋁色淀、胭脂紅、胭脂紅鋁色淀、赤藥紅；赤露紅鋁色淀、新紅，新紅鋁色淀；檸檬黃、檸檬黃鋁色淀、日落黃、日落黃鋁色淀、亮蘭；亮蘭鋁色淀、靛蘭、靛蘭鋁色淀，葉綠素銅鈉鹽、B-胡蘿B卜素、二氧化鈦、誘惑紅；酸性紅等，共21種。

由于火鍋底料組成復雜、基體干擾嚴重，檢測色素時按常規方法提取難度大，抽提不完全，影響測定的準確性，因此有必要建立火鍋底料中合成色素的高效和準確測定方法。為保護人體健康建立簡便、可靠、快速和靈敏的分析方法，對于監控火鍋底料的產品質量，確保食品安全，促進我國火鍋行業的健康和穩定發展，促進國際貿易，都具有十分重要的意義。

發明內容

本發明的目的是提供一種火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法。

為實現上述目的本發明采用的技術方案是：

火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法，步驟如下：

1）提取樣本

稱取5.00g待測試樣于50mL離心管中，加入20mL甲醇-丙酮溶液，60℃水浴10min，油脂融化后旋渦混勻，5000rpm離心5min，將上清液轉移至150mL旋蒸瓶中；加入20mL甲醇-丙酮溶液，重復上述操作1次；加15mL?2mol/L尿素甲醇溶液，重復上述操作2次；合并每次上清液于旋蒸瓶中，40℃下旋蒸濃縮至近干。

2）分離凈化樣本

分別用5mL乙酸乙酯-環己烷溶液、5mL水洗滌步驟1）中旋蒸瓶各2次，并將洗滌液轉移至50mL離心試管中，旋渦混勻1min，5000rpm離心5?min；將離心試管中乙酸乙酯-環己烷層轉移至10mL比色管中，40℃下氮氣濃縮至近干，用乙酸乙酯-環己烷溶液溶解比色管中殘渣并定容至5mL，得待GPC凈化的脂溶性樣本；向離心試管水相中加入1mL磷酸溶液，混勻，得待SPE凈化的水溶性樣本。

A、SPE凈化

將水溶性樣本全部轉移至聚酰胺樹脂層析柱中，以2～3mL/min流經層析柱，同時用5mL?0.1%磷酸溶液洗滌離心試管并轉移至層析柱中，待試液剛剛到達層析柱頂端時，再向層析柱中加入5mL?80%甲醇溶液淋洗并抽空，最后用10mL?5%氨水-甲醇溶液洗脫，棄去前3mL洗脫液，收集后7mL洗脫液于10mL比色管中，并用甲醇定容至刻度，得SPE凈化樣本。

B、GPC凈化

將脂溶性樣本按如下程序進行GPC凈化，得到GPC凈化樣本；

凝膠滲透色譜儀：凈化柱400?mm×25?mm，內裝Bio-Beads，S-X3，38?μm～75?μm填料；

流動相：環己烷-乙酸乙酯；

流速：4.7?mL/min；

進樣量：4.5?mL；

開始收集時間：13?min；

結束收集時間：20?min。

3）濃縮SPE凈化樣本和GPC凈化樣本

將32.9mL?GPC凈化樣本和9.0mL?SPE凈化樣本轉移至同一旋蒸瓶中，40℃下旋蒸濃縮至近干，用5mL甲醇-丙酮溶液洗滌旋蒸瓶并轉移至刻度試管中，在40℃下氮氣濃縮近干，加入0.9mL甲醇-丙酮溶液溶解刻度試管中殘渣，過濾膜過濾后，供?HPLC測定；過濾膜為0.45?mm親水性聚醚砜膜。

4）HPLC條件