[發明專利]火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法

有效

• 申請號: 201210143699.8
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN102636592A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 郗存顯;唐柏彬;李賢良;王國民;張雷;李應國;鄭小玲;張進忠
• 申請（專利權）人: 重慶出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/88
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

1.火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法，步驟如下：

1）提取樣本

稱取5.00g待測試樣于50mL離心管中，加入20mL甲醇-丙酮溶液，60℃水浴10min，油脂融化后旋渦混勻，5000rpm離心5min，將上清液轉移至150mL旋蒸瓶中；加入20mL甲醇-丙酮溶液，重復上述操作1次；加15mL?2mol/L尿素甲醇溶液，重復上述操作2次；合并每次上清液于旋蒸瓶中，40℃下旋蒸濃縮至近干；

2）分離凈化樣本

分別用5mL乙酸乙酯-環己烷溶液、5mL水洗滌步驟1）中旋蒸瓶各2次，并將洗滌液轉移至50mL離心試管中，旋渦混勻1min，5000rpm離心5?min；將離心試管中乙酸乙酯-環己烷層轉移至10mL比色管中，40℃下氮氣濃縮至近干，用乙酸乙酯-環己烷溶液溶解比色管中殘渣并定容至5mL，得待GPC凈化的脂溶性樣本；向離心試管水相中加入1mL磷酸溶液，混勻，得待SPE凈化的水溶性樣本；

A、SPE凈化

將水溶性樣本全部轉移至聚酰胺樹脂層析柱中，以2～3mL/min流經層析柱，同時用5mL?0.1%磷酸溶液洗滌離心試管并轉移至層析柱中，待試液剛剛到達層析柱頂端時，再向層析柱中加入5mL?80%甲醇溶液淋洗并抽空，最后用10mL?5%氨水-甲醇溶液洗脫，棄去前3mL洗脫液，收集后7mL洗脫液于10mL比色管中，并用甲醇定容至刻度，得SPE凈化樣本；

B、GPC凈化

將脂溶性樣本按如下程序進行GPC凈化，得到GPC凈化樣本；

凝膠滲透色譜儀：凈化柱400?mm×25?mm，內裝Bio-Beads，S-X3，38?μm～75?μm填料；

流動相：環己烷-乙酸乙酯；

流速：4.7?mL/min；

進樣量：4.5?mL；

開始收集時間：13?min；

結束收集時間：20?min；

3）濃縮SPE凈化樣本和GPC凈化樣本

將32.9mL?GPC凈化樣本和9.0mL?SPE凈化樣本轉移至同一旋蒸瓶中，40℃下旋蒸濃縮至近干，用5mL甲醇-丙酮溶液洗滌旋蒸瓶并轉移至刻度試管中，在40℃下氮氣濃縮近干，加入0.9mL甲醇-丙酮溶液溶解刻度試管中殘渣，過濾膜過濾后，供?HPLC測定；

4）HPLC測定條件

色譜柱：C₁₈；

流動相：甲醇-0.01mol/L磷酸鹽緩沖液，梯度洗脫；

檢測波長：程序可變波長，0～13.7min?520nm；13.71～15min?420nm；15.01～30min?520nm；

柱溫：30℃；

流速：1.0mL/min；

進樣量：10μL；

后運行時間：5.0min；

獲得液相色譜圖；

5）結果計算

用色譜數據處理機或按公式（1）計算試樣中合成色素的含量，計算結果須扣除空白值：

?????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????（1）

式中：

X_i?──待測試樣中待測物質的含量，單位為毫克每千克；

c_i?──從液相色譜圖上得到的待測物質的溶液濃度，單位為微克每毫升；

V?──樣液最終定容體積，單位為毫升；

m?──最終樣液所代表的待測試樣質量，單位為克。

2.根據權利要求1所述火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法，其特征是：步驟4）中所述梯度洗脫的洗脫程序如下：

時間/min????甲醇/%????0.01mol/L磷酸鹽緩沖液/%

??0??????????10??????????????90????????????

???14?????????100?????????????0

???30?????????100?????????????0。

3.根據權利要求1所述火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法，其特征是：步驟3）中所述過濾膜為0.45?mm親水性聚醚砜膜。

4.根據權利要求1所述火鍋底料中多種合成色素的同時測定方法，其特征是：步驟4）中所述色譜柱規格為250?mm×4.6?mm，5?μm。