[發明專利]EPO變體與Fc融合蛋白

無效

• 申請號: 201210143403.2
• 申請日: 2012-05-10
• 公開（公告）號: CN103387616A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 鄭心校;田燕;卞春東;查長春
• 申請（專利權）人: 江蘇省弗泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/79;C12N15/85;C12N5/10;A61K38/18;A61K47/48;A61P25/00
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 盧霞

技術領域

本發明涉及一種融合蛋白，具體地說，涉及一種EPO變體與Fc融合蛋白，屬于基因工程技術領域。

背景技術

????促紅細胞生成素（EPO)是一種公知的糖蛋白，最初因其對骨髓的激素性影響和參與成熟血紅細胞的生長與發育而被鑒定。除這種造血活性之外，最近已發現EPO還在許多組織中作為有效的、局部生成的改善代謝應激的分子而起作用。EPO的組織保護活性通過與促紅細胞生成素受體的相互作用而介導。例如，在腦部，EPO和它的受體與局部產生，受到代謝應激物的調控，并提供神經保護和抗炎的功能（Doggrell，SA.(2004)Expert?Opin?Investig?Drugs;13(11):1517-9)。在骨髓中，EPO提供的有益效果包括抑制神經元，少突膠質細胞和內皮細胞的凋亡和壞死，減少空化，降低脂質過氧化，動員內皮祖細胞，促進血管發生和恢復血管的自我調節（Gorio，A.等（2002）Proc?Natl?Acad?Sci?USA;99(14):9450-5；Leist?M.(2004)Science;305（5681）：239-42）。

?????然而對于應用EPO提供神經保護和防止組織損傷等功能來說，造血活性通常并不需要，并且如果施用大量的EPO來治療或緩解神經細胞損傷時，造血活性是有害的。氨甲酰化的促紅細胞生成素（CEPO）也顯示出表現出組織保護效應，但是沒有紅細胞生成效應（Leist?等（2004）?Science?305：239-242和WO?2005/025606?A1），但CEPO需要需要使用化學方法對EPO進行氨甲酰化，應用和效果都受到一定的限制。EPO變體重組蛋白，?1998年Qiu?H,?Belanger?A,?Yoon?HW,?Bunn?HF等人做了報道，然后由于EPO分子量小，EPO變體重組蛋白體內半衰期非常短，僅為4到11小時，對應病人而言，這就需要在短時間內反復多次接受多次注射。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，提供一種EPO變體與Fc融合蛋白。

本發明的EPO變體與Fc融合蛋白，所說的EPO變體為與造血功能相關氨基酸定向突變使得造血活性消失的EPO胞外區全序列，所說的Fc片段包括鉸鏈區、CH2區和CH3區，所說的EPO變體與Fc序列之間為直接融合或通過連接序列融合，所說的EPO變體選自人或其他動物的EPO，所說的Fc片段選自人或動物的IgG、IgM、IgD、IgA或者它們的亞型，所說Fc片段選自天然型Fc或與受體和/或補體結合相關的氨基酸改變的突變型Fc。

所說的EPO變體的氨基酸序列如SEQ?ID.1?所示，DNA序列如SEQ?ID.2?所示。

所說的Fc片段選自人IgG1、小鼠IgG2a或大鼠IgG2a，其中人IgG1的氨基酸序列如SEQ?ID.3所示，小鼠IgG2a的氨基酸序列如SEQ?ID.4?所示、大鼠IgG2a的氨基酸序列如SEQ?ID.5?所示。

所說的突變型Fc片段選自突變型人IgG1或小鼠IgG2a，其中突變型人IgG1的氨基酸序列如SEQ?ID.6?所示，突變型小鼠IgG2a的氨基酸序列如SEQ?ID.7?所示。

本發明還包括一種EPO變體與Fc融合蛋白編碼DNA序列的載體，所說的載體為真核載體。

所說的真核載體為哺乳動物細胞表達載體。由于原核表達體系所表達的產物，缺乏糖基化修飾功能，蛋白功能不能保證，因此在此發明中，優選哺乳動物細胞表達載體，如pRc-CMV(?Invitrogen公司)。

本發明還包括一種EPO變體與Fc融合蛋白編碼DNA序列的載體的宿主細胞，所說的宿主細胞選自真核細胞或原核細胞。

所說的宿主細胞選自CHO細胞。

本發明的EPO變體與Fc融合蛋白的用途，包括促進神經干細胞再生，制備預防和治療神經細胞損傷的藥物中的應用。