[發明專利]白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜

有效

• 申請號: 201210141542.1
• 申請日: 2012-05-09
• 公開（公告）號: CN103389343A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發明（設計）人: 楊義芳;黃春躍;唐博雅;羅澤淵;李存勇;朱緒民;蒲琴
• 申請（專利權）人: 滇虹藥業集團股份有限公司;上海醫藥工業研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/36
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 謝燕軍;陳長會

1.白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，所述方法包括以下步驟：

(1)制備對照品溶液：分別配制鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀、黃連堿、鹽酸藥根堿、秦皮甲素、秦皮乙素和白頭翁皂苷B4對照品溶液；

(2)制備供試品溶液：稱取白頭翁湯顆粒，進行提取，提取液用微孔濾膜過濾，即得供試品溶液；

(3)采用高效液相色譜法進行測定得到指紋圖譜，其中色譜條件為：色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料；采用梯度洗脫；紫外檢測波長：可變波長檢測；

(4)評價相似度：供試品指紋圖譜采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統2004A版》進行評價。

2.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(1)中所述對照品溶液的濃度均為20～500μg/mL。

3.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(2)中所述白頭翁湯顆粒的稱重量為0.1～10g。

4.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(2)中所述提取步驟為采用0％～50％甲醇提取；再采用超聲提取，提取時間為10～80min。

5.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(2)中所述微孔濾膜孔徑為0.2μm～0.8μm。

6.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(3)中所述梯度洗脫的流動相為0.01～3％磷酸、0.1～3％三乙胺水溶液與乙腈組成的梯度洗脫液；梯度洗脫時間為20～180min，流速0.3～1.5ml/min；柱溫20～45℃；紫外檢測波長：200nm～400nm，以程序可變波長檢測。

7.如權利要求6所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(3)中所述梯度洗脫的洗脫程序以如以下濃度配制進行：0min→25min→45min→55min→70min，乙腈5％→12％→25％→30％→30％。

8.根據權利要求6所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(3)中所述程序可變波長檢測的檢測程序為：0min→57min檢測波長為315nm；57.1min→70min，檢測波長為210nm。

9.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(3)所述測定中，高效液相色譜儀自動進樣器進樣0.5～20μl，照高效液相色譜法測定，得到指紋圖譜。

10.根據權利要求1所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法，其特征在于：步驟(4)所述評價相似度中，供試品指紋圖譜在程序可變波長檢測下的相似度均大于0.90。

11.根據權利要求1-10任一項所述的白頭翁湯顆粒可變波長指紋圖譜的建立方法所測得的白頭翁湯顆粒標準指紋圖譜，其特征在于：指紋圖譜中有25個共有峰，保留時間分別為：3.9min、9.1min、13.6min、15.5min、17.3min、18.1min、19.4min、21.3min、22.1min、24.9min、26.4min、28.7min、29.4min、30.4min、31.3min、35.3min、38.3min、40.4min、46.7min、47.0min、47.5min、52.3min、53.0min、57.5min、59.3min，峰號依次記為1-25號，以5號峰(秦皮甲素)作為參比峰，峰號(相對保留時間)分別為：1(0.227)、2(0.525)、3(0.783)、4(0.895)、5(1.000)、6(1.042)、7(1.120)、8(1.225)、9(1.271)、10(1.435)、11(1.522)、12(1.651)、13(1.693)、14(1.753)、15(1.803)、16(2.034)、17(2.208)、18(2.329)、19(2.691)、20(2.709)、21(2.738)、22(3.016)、23(3.053)、24(3.317)、25(3.418)；其中24號峰為白頭翁皂苷B4，22號峰為鹽酸巴馬汀，23號峰為鹽酸小檗堿，21號峰為鹽酸藥根堿，20號峰為黃連堿，10號峰為秦皮乙素，5號峰為秦皮甲素。

12.根據權利要求10所述的白頭翁湯顆粒標準指紋圖譜，其特征在于：所述25個共有峰中，單峰面積占總峰面積大于5％，而小于10％的共有峰為5號峰、9號峰、15號峰、24號峰；單峰面積占總峰面積大于10％的共有峰為13號峰、23號峰；其余色譜峰峰面積均小于5％。