[發明專利]兩親性三嵌段聚合物及其制備方法和siRNA藥物載體

有效

• 申請號: 201210140883.7
• 申請日: 2012-05-08
• 公開（公告）號: CN102786695A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發明（設計）人: 張必良;周麗
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: C08G81/00
• 分類號: C08G81/00;C08G63/91;C08G65/48;A61K48/00;A61K47/48
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

技術領域

本發明涉及一種基于聚羥基脂肪酸酯的兩親性三嵌段聚合物及其制備方法和siRNA藥物載體，屬于生命醫學領域。?

背景技術

RNA干擾是一種由21-23個核苷酸組成的雙鏈小分子干擾RNA(siRNA)介導的、序列特異性的、轉錄后基因沉默技術。由于RNA干擾技術能高效、特異的沉默疾病相關基因，使其已逐漸被發展成為新型的治療遺傳性或獲得性疾病包括病毒感染和癌癥等的基因治療手段，到目前為止已經開展了大量利用siRNA進行疾病治療的動物實驗和臨床實驗。這其中主要包括針對乙型和丙型肝炎病毒、艾滋病毒等的病毒實驗，與神經退化性疾病相關的研究以及以表達端粒酶或表皮生長因子等基因為靶基因的癌癥治療。其中以siRNA治療由視網膜退化引起的老年黃斑病變研究已經進入臨床三期試驗階段。雖然siRNA在體外應用研究中及細胞水平上顯示出良好的沉默效果，但由于其巨大的分子量及自身所攜帶的大量負電荷使其不能自主穿越細胞膜進入細胞發揮作用，在系統運輸時易引起非特異性的脫靶效應和免疫應答，同時還面臨被核酸酶降解等障礙，導致在以治療人類疾病為目的的siRNA體內系統運輸面臨著巨大的挑戰。所以siRNA的轉染問題成為限制其應用的主要瓶頸。如何增強siRNA穿透細胞膜的能力，提高其在體內的穩定性和靶向性等都是siRNA藥物載體急需解決的問題。因此設計和合成安全有效的siRNA藥物載體已成為目前siRNA藥物研發的重要方向。?

病毒載體因潛在的安全性問題及高成本等缺點使其廣泛的臨床應用受到極大的限制。而非病毒的陽離子脂質和類脂及陽離子聚合物載體因安全性高、副作用小、生產成本低等特點越來越受到人們的青睞。已報道的陽離子脂質體和類脂，如穩定的核酸脂肪微滴(SNALP)、Oligofectamine、脂醇、i-FECT和脂醇98N12-5(1)，其對siRNA的運輸效果已得到證實；陽離子聚合物能通過靜電相互作用與siRNA分子磷酸基團所帶的負電荷結合形成聚合電解質絡合物，該絡合物通過刺激非特異性的細胞內吞將siRNA運輸進細胞，然后經“質子海綿”效應介導的內涵體逃逸將siRNA分子從運輸載體上解離，從而實現對siRNA的運輸。傳統方法采用水溶性的陽離子聚合物與siRNA分子互混得到兩者的復合物或納米顆粒，雖然可以實現對siRNA的運輸目的，但該方法重復性差，而且工藝難以放大，而兩親性的陽離子聚合物能自組裝成穩定的納米顆粒，該納米顆粒具有實體瘤的高通透性和滯留效應(EPR效應，Enhanced?permeability?and?retention)，可促進siRNA藥物在腫瘤組織的聚集，并能有效的被腫瘤細胞吸收。目前用于siRNA運輸的陽離子聚合物材料包括聚乙烯亞胺(PEI)、聚左旋賴氨酸?(PLL)、樹狀分子，殼聚糖等，他們與不同的疏水性材料結合后，能自組裝形成不同結構的納米顆粒，既可實現對siRNA的包裹，也可將siRNA錨定在其表面；對這些納米顆粒進行適當的化學修飾或配體修飾還可增強siRNA在體內的穩定性和靶向性。盡管針對siRNA藥物運輸載體的研究取得了一定的突破和發展，但要使siRNA藥物成功用于治療人類疾病，仍有一些關鍵性問題需要解決，如：毒性、特異性、靶向性、免疫刺激、轉染效率低等。由此，生物相容性好、能快速去質子化的可生物降解的兩親性的陽離子高分子聚合物載體因能有效結合和保護siRNA分子，增強細胞對siRNA分子的吸收，提高其穩定性和靶向性，并能使siRNA分子有效釋放，實現治療目的，而使得這類載體在siRNA藥物給藥中具有更好的優勢和應用前景。?