[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)家蠅對(duì)殺蟲(chóng)劑靶標(biāo)抗性的方法及試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210140577.3
• 申請(qǐng)日: 2012-05-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103388022A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邱星輝;潘婧;李梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京泛華偉業(yè)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11280
• 代理人: 劉丹妮

1.一種檢測(cè)家蠅對(duì)殺蟲(chóng)劑靶標(biāo)抗性的方法，所述殺蟲(chóng)劑為DDT和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑，其特征在于所述的方法包含步驟：

（1）提取單頭家蠅基因組DNA；

（2）檢測(cè)家蠅鈉離子通道基因1014位上的L1014F突變和L1014H突變。

2.權(quán)利要求1所述的方法，其中所述的家蠅鈉離子通道基因的序列選自SEQ?ID?NO:５、SEQ?ID?NO:6、SEQ?ID?NO:7。

3.權(quán)利要求1-2中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的檢測(cè)是通過(guò)PCR方法進(jìn)行的。

4.權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的PCR方法使用下列引物：

P1：GTGCTGTGCGGAGAGTGG（SEQ?ID?NO:1）、

P2：GAAGCCTCCATCCTGGGAG（SEQ?ID?NO:2）、

P3：AGCTGTATACCCTTCTTCT（SEQ?ID?NO:3）、以及

P4：CGAAGTTGGACAAAAGCAAA（SEQ?ID?NO:4）。

5.權(quán)利要求4所述的方法，其中還包括步驟：將PCR產(chǎn)物使用DNA限制性?xún)?nèi)切酶Tsp509I或Nla?III進(jìn)行切割，并對(duì)切割后的核酸片段進(jìn)行檢測(cè)。

6.權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于檢測(cè)家蠅鈉離子通道基因1014位的表型包括執(zhí)行以下的步驟：

a）使用引物P1和P2對(duì)家蠅基因組DNA進(jìn)行PCR；

b）使用引物P3和P4對(duì)家蠅基因組DNA進(jìn)行PCR；

c）使用DNA限制性?xún)?nèi)切酶Tsp509I將步驟a）得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切；

d）使用DNA限制性?xún)?nèi)切酶Nla?III將步驟b）得到的PCR產(chǎn)物進(jìn)行酶切；以及

e）將步驟c）和d）步驟中得到的酶切產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)；

優(yōu)選地，所述的電泳為瓊脂糖凝膠電泳。

7.權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于在步驟a）和步驟b）中的PCR條件為94℃，4分鐘，35個(gè)周期；94℃，30s；52℃，30s；72℃，30s；72℃，10分鐘。

8.一種用于家蠅對(duì)DDT和擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi)殺蟲(chóng)劑抗性檢測(cè)的試劑盒，該試劑盒包括：

（1）用于提取單頭家蠅基因組DNA的試劑；

（2）用于檢測(cè)家蠅鈉離子通道基因1014位的表型的試劑。

9.權(quán)利要求8所述的試劑盒，其中所述的用于檢測(cè)家蠅鈉離子通道基因1014位的表型的試劑包含下列引物：

P1：GTGCTGTGCGGAGAGTGG（SEQ?ID?NO:1）、

P2：GAAGCCTCCATCCTGGGAG（SEQ?ID?NO:2）、

P3：AGCTGTATACCCTTCTTCT（SEQ?ID?NO:3）、以及

P4：CGAAGTTGGACAAAAGCAAA（SEQ?ID?NO:4）。

10.權(quán)利要求8或9所述的試劑盒，其中所述的用于檢測(cè)家蠅鈉離子通道基因1014位的表型的試劑包含DNA限制性?xún)?nèi)切酶Tsp509Ｉ和DNA限制性?xún)?nèi)切酶Nla?III。