[發(fā)明專利]一種菝葜皂苷元單克隆抗體及其應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210140532.6
• 申請日: 2012-05-09
• 公開（公告）號: CN102786594A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 余伯陽;許玉;劉吉華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國藥科大學(xué)
• 主分類號: C07K16/16
• 分類號: C07K16/16;C07K14/765;G01N33/577
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1.一種菝葜皂苷元單克隆抗體制備方法及基于單克隆抗體的分析方法，其單克隆抗體由按常規(guī)雜交瘤技術(shù)進行骨髓瘤細胞與產(chǎn)生抗菝葜皂苷元抗體的脾細胞融合制備而成的雜交瘤分泌而來。

2.如權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，特征在于其制備方法采用的脾細胞得自以菝葜皂苷元與牛血清白蛋白偶聯(lián)物免疫的動物。

3.如權(quán)利要求2所述的單克隆抗體，其特征在于，所述的偶聯(lián)物制備過程如下：

(1)先將菝葜皂苷元琥珀酰酯衍生物(SAR-HS)9.8mg、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)13mg、N，N′-二環(huán)乙基碳化亞胺(DCC)19mg混合于1mL?DMF中，置磁力攪拌器上室溫攪拌反應(yīng)4小時后加入30mg牛血清白蛋白(BSA)溶液，4℃攪拌反應(yīng)過夜。反應(yīng)產(chǎn)物裝入透析袋中，雙蒸水透析72小時，冷凍干燥得白色粉末，-20℃保存。

(2)用相同方法制備菝葜皂苷元琥珀酰酯衍生物與卵清蛋白(OVA，21mg)的偶聯(lián)物(SAR-HS-OVA)。

4.如權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，所述的融合制備過程如下：

(1)菝葜皂苷元琥珀酯衍生物與牛血清白蛋，白偶聯(lián)物免疫Balb/c小鼠。

(2)將脾細胞與骨髓瘤細胞按5∶1的比例混合，45秒內(nèi)加入聚乙二醇促進細胞融合，然后加入DMEM培養(yǎng)基水浴中靜置10min，離心，棄去上清，細胞加入含有HAT的DMEM培養(yǎng)液，混合均勻后滴加到96孔板內(nèi)，于CO₂濃度為5％和37℃恒溫箱中進行融合細胞培養(yǎng)。

(3)SAR-HS-OVA包被酶標板，篩選陽性雜交瘤細胞。用酶聯(lián)免疫間接法對細胞上清液進行鑒定：陽性值大于陰性值2倍，且陽性值大于0.5以上的細胞孔內(nèi)為陽性細胞，純化、培養(yǎng)并凍存陽性細胞。

(4)陽性克隆的雜交瘤細胞注入石蠟處理的Balb/c小鼠腹腔，進行單克隆抗體的制備。

5.一種菝葜皂苷元單克隆抗體，其特征在于，所述的抗體對菝葜皂苷元具有特異性，與魯斯可皂苷元，薯蕷皂苷元，短亭山麥冬皂苷C的交叉反應(yīng)分別為33％，5.7％，29％，而與三七?皂苷R1，甘草酸二銨，齊墩果酸無交叉反應(yīng)，適用于藥材及生物樣品中菝葜皂苷元快速痕量檢測。?