[發(fā)明專利]一種阿拉伯糖誘導(dǎo)的表達(dá)載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210139353.0
• 申請日: 2012-05-07
• 公開（公告）號(hào): CN102676509A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 溫廷益;張蕓;商秀玲;來書娟
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/63;C12N1/21;C12P13/14;C12R1/15
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

1.一種DNA片段，依次包括谷氨酸棒桿菌的組成型啟動(dòng)子P_hom、阿拉伯糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因araE、調(diào)控蛋白基因araC、調(diào)控蛋白基因啟動(dòng)子P_c、阿拉伯糖啟動(dòng)子P_BAD。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA片段，其特征在于：

所述谷氨酸棒桿菌的組成型啟動(dòng)子P_hom為序列表中序列1自5’末端第5239-5369位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述阿拉伯糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因araE為序列表中序列1自5’末端第5382-6800位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述調(diào)控蛋白基因araC為序列表中序列1自5’末端第6821-7699位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述調(diào)控蛋白基因啟動(dòng)子P_c為序列表中序列1自5’末端第7850-7878位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述阿拉伯糖啟動(dòng)子P_BAD為序列表中序列1自5’末端第7975-8002位核苷酸所示的雙鏈DNA片段。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的DNA片段，其特征在于：

所述DNA片段的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第5239-8046位。

4.一種表達(dá)載體，為環(huán)狀雙鏈DNA分子，自5’末端至3’末端依次包括大腸桿菌ori?pUC、谷氨酸棒桿菌的復(fù)制起點(diǎn)ori?pBL1、氯霉素抗性基因cat、權(quán)利要求1-3中任一所述的DNA片段和轉(zhuǎn)錄終止子rrnB。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于：

所述大腸桿菌ori?pUC的核苷酸序列為序列表中序列1自5’末端第967-1539位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述谷氨酸棒桿菌的復(fù)制起點(diǎn)ori?pBL1為序列表中序列1自5’末端第1724-4278位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述氯霉素抗性基因cat為序列表中序列1自5’末端第4410-5069位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述轉(zhuǎn)錄終止子rrnB為序列表中序列1自5’末端第67-492位核苷酸所示的雙鏈DNA片段。

6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的表達(dá)載體，其特征在于：

在所述DNA片段的阿拉伯糖啟動(dòng)子P_BAD和所述轉(zhuǎn)錄終止子rrnB之間還包括多克隆位點(diǎn)，所述多克隆位點(diǎn)自5’末端至3’末端依次為HindIII、PstI、SalI、XbaI、BamHI、AvaI、XmaI、SmaI、EcoRI。

7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一所述的表達(dá)載體，其特征在于：所述表達(dá)載體的核苷酸序列為序列表中的序列1。

8.一種制備權(quán)利要求4-7任一所述表達(dá)載體的方法，包括如下步驟：將序列1自5’末端第5239-8046位核苷酸插入pXMJ19中得到的載體。

9.權(quán)利要求4-6任一所述的表達(dá)載體在表達(dá)外源基因中的應(yīng)用；

所述外源基因具體為β-半乳糖苷酶基因、upp基因、綠色熒光蛋白編碼基因、odhI基因；

所述β-半乳糖苷酶基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列2；

所述upp基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列3自5’末端第727-1362位核苷酸；

所述綠色熒光蛋白編碼基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列4；

所述odhI基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列5。

10.一種重組載體，為將序列表中的序列5插入權(quán)利要求4-6任一所述的表達(dá)載體中得到的載體；

或含有所述重組載體的重組菌；

或所述的重組菌在制備谷氨酸中的應(yīng)用。