[發(fā)明專(zhuān)利]一種阿拉伯糖誘導(dǎo)的表達(dá)載體及其構(gòu)建方法和應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210139353.0 | 申請(qǐng)日： | 2012-05-07 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102676509A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-09-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 溫廷益;張蕓;商秀玲;來(lái)書(shū)娟 | 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人： | 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N15/11 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N15/11;C12N15/63;C12N1/21;C12P13/14;C12R1/15 |
| 代理公司： | 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245 | 代理人： | 關(guān)暢 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 阿拉伯糖 誘導(dǎo) 表達(dá) 載體 及其 構(gòu)建 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種DNA片段，依次包括谷氨酸棒桿菌的組成型啟動(dòng)子Phom、阿拉伯糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因araE、調(diào)控蛋白基因araC、調(diào)控蛋白基因啟動(dòng)子Pc、阿拉伯糖啟動(dòng)子PBAD。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的DNA片段，其特征在于：
所述谷氨酸棒桿菌的組成型啟動(dòng)子Phom為序列表中序列1自5’末端第5239-5369位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述阿拉伯糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因araE為序列表中序列1自5’末端第5382-6800位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述調(diào)控蛋白基因araC為序列表中序列1自5’末端第6821-7699位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述調(diào)控蛋白基因啟動(dòng)子Pc為序列表中序列1自5’末端第7850-7878位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述阿拉伯糖啟動(dòng)子PBAD為序列表中序列1自5’末端第7975-8002位核苷酸所示的雙鏈DNA片段。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的DNA片段，其特征在于：
所述DNA片段的核苷酸序列為序列表中的序列1自5’末端第5239-8046位。
4.一種表達(dá)載體，為環(huán)狀雙鏈DNA分子，自5’末端至3’末端依次包括大腸桿菌ori?pUC、谷氨酸棒桿菌的復(fù)制起點(diǎn)ori?pBL1、氯霉素抗性基因cat、權(quán)利要求1-3中任一所述的DNA片段和轉(zhuǎn)錄終止子rrnB。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，其特征在于：
所述大腸桿菌ori?pUC的核苷酸序列為序列表中序列1自5’末端第967-1539位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述谷氨酸棒桿菌的復(fù)制起點(diǎn)ori?pBL1為序列表中序列1自5’末端第1724-4278位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述氯霉素抗性基因cat為序列表中序列1自5’末端第4410-5069位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；
所述轉(zhuǎn)錄終止子rrnB為序列表中序列1自5’末端第67-492位核苷酸所示的雙鏈DNA片段。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的表達(dá)載體，其特征在于：
在所述DNA片段的阿拉伯糖啟動(dòng)子PBAD和所述轉(zhuǎn)錄終止子rrnB之間還包括多克隆位點(diǎn)，所述多克隆位點(diǎn)自5’末端至3’末端依次為HindIII、PstI、SalI、XbaI、BamHI、AvaI、XmaI、SmaI、EcoRI。
7.根據(jù)權(quán)利要求4-6中任一所述的表達(dá)載體，其特征在于：所述表達(dá)載體的核苷酸序列為序列表中的序列1。
8.一種制備權(quán)利要求4-7任一所述表達(dá)載體的方法，包括如下步驟：將序列1自5’末端第5239-8046位核苷酸插入pXMJ19中得到的載體。
9.權(quán)利要求4-6任一所述的表達(dá)載體在表達(dá)外源基因中的應(yīng)用；
所述外源基因具體為β-半乳糖苷酶基因、upp基因、綠色熒光蛋白編碼基因、odhI基因；
所述β-半乳糖苷酶基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列2；
所述upp基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列3自5’末端第727-1362位核苷酸；
所述綠色熒光蛋白編碼基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列4；
所述odhI基因的核苷酸序列具體為序列表中的序列5。
10.一種重組載體，為將序列表中的序列5插入權(quán)利要求4-6任一所述的表達(dá)載體中得到的載體；
或含有所述重組載體的重組菌；
或所述的重組菌在制備谷氨酸中的應(yīng)用。
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