[發明專利]蛇毒神經生長因子活性多肽的篩選方法

無效

• 申請號: 201210138546.4
• 申請日: 2012-05-04
• 公開（公告）號: CN102816766A
• 公開（公告）日: 2012-12-12
• 發明（設計）人: 徐軍;吳鵬;祁榮;張忠
• 申請（專利權）人: 沈陽醫學院
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/63;C07K14/48
• 代理公司: 廣州天河互易知識產權代理事務所(普通合伙) 44294
• 代理人: 鮑子玉

1.蛇毒神經生長因子活性多肽的篩選方法，其特征在于，包括以下步驟：

一、融合蛋白質的構建：選擇活化的重組蛇毒神經生長因子，以vNGF為模板，進行功能區域斷點分析，然后通過PCR引物法構建至少兩個不同長度、不同組合的片段序列，并作標記；

二、質粒表達系統的構建：將上述片段序列分別組裝在pBluscriptII?SK+質粒中，構建vNGF的轉移載體，并使其在DH5a中克隆，形成活性多肽質粒轉移系統，然后利用單一酶切點的黏性末端連接方法將具有相同黏性末端的至少兩個不同長度的基因片段和目的片段連接，分別組裝在pQE30質粒的BamHI和HindIII酶切位點之間，克隆并表達vNGF的活性多肽；

三、通過6X組氨酸回收提純技術進行分離、鑒定、提純，形成vNGF活性多肽的刺激物原液；

四、驗證原核表達vNGFβ片段的生物活性，進行多肽篩選。

2.如權利要求1所述蛇毒神經生長因子活性多肽的篩選方法，其特征在于：

所述片段序列為2個，分別為：vNGF?F1片段，對應20-388基因位點，計369bp；vNGF?F2片段，對應389-751基因位點，計363bp。

3.如權利要求1所述蛇毒神經生長因子活性多肽的篩選方法，其特征在于：

所述驗證原核表達vNGF片段的生物活性的方法為：大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤培養檢測法。