[發明專利]一種靜脈注射用肝靶向白介素-12/殼聚糖納米給藥系統及其制備方法

無效

• 申請號: 201210138396.7
• 申請日: 2012-05-07
• 公開（公告）號: CN102641495A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 王守立
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: A61K38/20
• 分類號: A61K38/20;A61K47/48;A61P1/16;A61P35/00
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 陶海鋒

技術領域

本發明涉及一種靶向給藥系統，具體涉及一種靜脈注射用肝靶向白介素-12/殼聚糖納米給藥系統及其制備方法。

背景技術

白介素-12（Interleukin-12,IL-12）因其具有強大的抗腫瘤活性及抗轉移作用而被廣泛重視。然而，自從1997年報道了2例在Ⅱ期臨床中靜脈注射IL-12致死的病例以來(Leonard?JP,et?al.Effects?of?single-dose?interleukin-12exposure?on?interleukin-12-associated?toxicity?and?interferon-gamma?production.Blood.1997;90:2541-8)IL-12臨床應用至今停止不前。多年來，各國科學家一直在尋找降低其毒副作用的有效方法。殼聚糖（Chitosan，CS）作為一種具有生物相容性、可降解性、低毒性的聚陽離子天然高分子材料，且具有理化性質的可修飾性，近年來成為生物治療載體的研究熱。近期有學者通過制備IL-12/殼聚糖納米粒注射液，提高了IL-12的生物利用率，成功抑制了小鼠膀胱內腫瘤的生長(Zaharoff?DA,et?al.Intravesical?immunotherapy?of?superficial?bladder?cancer?with?chitosan/interleukin-12.Cancer?Res.2009;69:6192-9.)。但這種瘤內注射的給藥方式僅限于部分可觸及腫瘤的局部治療，系統性給藥仍然面臨靶向性差、毒副作用大的風險。

我國是肝臟疾病的高發區，因此研制新型肝靶向給藥系統，可減少藥物用量、降低毒副作用。肝靶向IL-12載體系統能通過肝內釋放IL-12改善肝內免疫微環境，不僅能提高原發性肝癌的療效，還能有效預防結直腸癌肝轉移。肝靶向給藥系統根據導向機理而論可分為被動靶向和主動靶向，前者指載藥微粒被單核-巨噬細胞（尤其是肝的Kuffer細胞）攝取，通過正常生理過程運送到肝臟的治療方法；而后者是指用“靶向分子”修飾的藥物載體，如用去唾液酸糖蛋白受體介導的靶向藥物。由于糖類分子能提高藥物和腫瘤細胞的親和力，有利于藥物通過腫瘤細胞，因此殼聚糖作為一種多聚多糖陽離子，是腫瘤藥物的最適宜載體之一。

中國專利CN101254308A公布了用甘草次酸-聚乙二醇修飾殼聚糖納米粒的制備方法，該發明充分利用甘草次酸的高度肝靶向性，通過不同位點對其親水改性制備成大分子復合物，實現了肝靶向定位，但沒有提供該復合載藥的肝內藥物釋放效率的詳細資料。中國專利CN101766820A公布了用三聚磷酸負離子、戊二醛交聯殼聚糖納米粒，再將葉酸連接到該載體上。中國專利CN102225051A利用了羧甲基殼聚糖的pH敏感性及葉酸的腫瘤靶向性，制備了葉酸-羧甲基殼聚糖修飾pH敏感性納米多柔比星（Doxorubicin）納米脂質體。這類復合載體均利用了羧甲基殼聚糖pH敏感性的特性，由葉酸類靶向分子實現了腫瘤靶向的目的，但不具有肝靶向定位的功效。

發明內容

本發明的發明目的是提供一種靜脈注射用肝靶向白介素-12/殼聚糖納米給藥系統，該載藥系統根據被動肝靶向機制，篩選肝靶向性強的納米球制備條件；利用修飾后納米球的兩性電解質性質制備pH敏感性載藥系統。

為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是：一種靜脈注射用肝靶向白介素-12/殼聚糖納米給藥系統，它是以肝靶向化合物多聚磷酸鈉-殼聚糖為載體材料，交聯包埋白介素-12（IL-12）制成，納米球粒徑為200～500nm，載藥率為2～25%；所述殼聚糖的脫乙酰度≥80%。

上述靜脈注射用肝靶向白介素-12/殼聚糖納米給藥系統的制備方法，包括如下步驟：

(1)制備多聚磷酸鈉-殼聚糖修飾白介素-12納米球：

分別配制濃度為1～5μg/mL的白介素-12水溶液和濃度為1～5mg/mL的殼聚糖醋酸溶液，殼聚糖的脫乙酰度≥80%，將上述兩溶液以體積比1∶3～1∶6混勻，在磁力攪拌200～400r/min條件下，緩慢滴加濃度為0.5～1.6mg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，加入的三聚磷酸鈉溶液的總體積為白介素-12水溶液體積的0.5～4倍，獲得白介素-12納米球懸液；

(2)將步驟(1)獲得的懸液加入醋酸-醋酸鈉緩沖液中混勻，所述懸液和醋酸-醋酸鈉緩沖液的體積比1∶1～1∶3為，用冰乙酸調節pH值至5.5～6.5間，均勻交聯后微孔濾膜過濾，配制成多聚磷酸鈉化學修飾的白介素-12殼聚糖納米球懸液。