[發(fā)明專利]一種用超高效液相色譜法測定養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類成分含量的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210138333.1
• 申請日: 2012-05-07
• 公開（公告）號: CN103389353A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 佟玲;朱永宏;陳國輝
• 申請（專利權(quán)）人: 天士力制藥集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所 11130
• 代理人: 王為

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種藥物成分的分析檢測方法，特別涉及一種用超高效液相色譜法測定養(yǎng)血清腦顆粒中4種酚酸類成分含量的方法。

背景技術(shù)：

養(yǎng)血清腦顆粒是天津天士力制藥股份有限公司研制的現(xiàn)代中藥制劑，并于1996年獲得國家新藥證書，并于1999年被列入國家基本藥物目錄，2000年被列入國家醫(yī)保藥品目錄。養(yǎng)血清腦顆粒是由當(dāng)歸、川芎、白芍、雞血藤、決明子、延胡索等11味中藥組成，并經(jīng)現(xiàn)代高科技手段提取后，加入適當(dāng)輔料，經(jīng)混合制粒等制劑過程制成的一種顆粒劑。該制劑具有有效成分溶出快，生物利用度高等優(yōu)點。養(yǎng)血清腦顆粒具有養(yǎng)血平肝，活血通絡(luò)的功效，可用于血虛肝亢所致的頭痛、眩暈眼花、心煩易怒、失眠多夢等病癥，在臨床上具有顯著的療效。

養(yǎng)血清腦顆粒中的君藥當(dāng)歸及主要成分川芎、白芍中均含有酚酸成分。近年來的研究表明酚酸類化合物不僅具有顯著的抗氧化、抗自由基、抑制低密度脂蛋白的氧化以及預(yù)防心血管疾病的作用,而且具有抗癌、抗炎癥和血小板凝聚等功能,在醫(yī)藥方面有廣泛的用途。如研究表明綠原酸、阿魏酸、咖啡酸和迷迭香酸在心血管保護、抗誘變抗癌、抗血栓、抗炎、抗菌、抗病毒、利膽止血及抗氧化等方面都有明顯作用，對于酚酸類化合物的檢測方法主要有分光光度法、薄層色譜法、毛細管電泳法以及高效液相色譜法,文獻報道，養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類化合物的檢測方法可以采用高效液相色譜電化學(xué)檢測(HPLC一ECD)法,該方法可以對養(yǎng)血清腦顆粒中沒食子酸、原兒茶酸、咖啡酸和阿魏酸同時進行測定。但檢測方法操作復(fù)雜，精度不高，實際操作過程中容易出現(xiàn)差錯。目前對養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類有效成分的常規(guī)的檢測方法為高效液相色譜分析法（參見：任樹林，養(yǎng)血清腦顆粒中4種酚酸的高效液相色譜分析；藥物分析雜志，2006,26（8）：1145）。但是，采用此方法分析時間較長，例如咖啡酸和阿魏酸保留時間分別約為13min和20min，不利于工業(yè)化大生產(chǎn)過程中對產(chǎn)品的快速檢測，因此不利于實際生產(chǎn)中對養(yǎng)血清腦顆粒的質(zhì)量評價和控制。

因此，需要提供一種養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類物質(zhì)的檢測方法，以加強對養(yǎng)血清腦顆粒的質(zhì)量控制。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明涉及一種用超高效液相色譜法測定養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類成分含量的方法，該方法包括以下步驟：

步驟1、對照品溶液的制備；

步驟2、養(yǎng)血清腦顆粒制劑供試品溶液的制備；

步驟3、將對照品溶液和供試品溶液注入超高效液相色譜儀，得到色譜圖；

步驟4、根據(jù)色譜圖計算供試品溶液中4種酚酸類成分含量，

其中，檢測樣品采用50~100%的甲醇提取，色譜條件為采用C18色譜柱，流動相為甲酸乙腈-甲酸水溶液，檢測器為二極管陣列檢測器。

本發(fā)明所述的4種酚酸類成分是咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸，這些酸都是已知成分，記載在有關(guān)的藥物手冊中，本發(fā)明是對這4種酚酸類成分同時進行檢測，以利于準(zhǔn)確把握養(yǎng)血清腦顆粒的有效成分的含量。

本發(fā)明的方法，其中，步驟1對照品溶液的制備是將咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對照品配制成溶液以便用于超高效液相色譜儀。

本發(fā)明所述對照品溶液的制備方法是：稱取咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對照品，分別用70-80%甲醇配制成200-250μg/mL的咖啡酸溶液，200-250μg/mL的阿魏酸溶液，250-300μg/mL的綠原酸溶液，200-250μg/mL的迷迭香酸溶液。

優(yōu)選的配制方法是：準(zhǔn)確稱定咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對照品置于10mL容量瓶中以75%甲醇定容至刻度。分別得220μg/mL咖啡酸，232μg/mL阿魏酸，271μg/mL綠原酸，219μg/mL迷迭香酸溶液，置于4℃冰箱待用。

其中步驟2、養(yǎng)血清腦顆粒制劑供試品溶液的制備是將養(yǎng)血清腦顆粒制劑配制成溶液以便用于超高效液相色譜儀。

本發(fā)明所述供試品溶液的制備方法是：稱量約0.25-0.75g養(yǎng)血清腦顆粒制劑，用70-80%甲醇提取，提取液過濾，濾液配制成10ml的溶液。

優(yōu)選的配制方法是：分別稱量約0.5g各不同批次養(yǎng)血清腦顆粒制劑，置于10mL容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，超聲提取15min，放至室溫后，以75%甲醇補足至刻度，用0.45微孔濾膜濾過，棄去初濾液取續(xù)濾液做為制劑供試品溶液。