[發(fā)明專利]一種用超高效液相色譜法測(cè)定養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類成分含量的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210138333.1
• 申請(qǐng)日: 2012-05-07
• 公開（公告）號(hào): CN103389353A
• 公開（公告）日: 2013-11-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 佟玲;朱永宏;陳國(guó)輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天士力制藥集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所 11130
• 代理人: 王為

1.一種用超高效液相色譜法測(cè)定養(yǎng)血清腦顆粒中酚酸類成分含量的方法，該方法包括以下步驟：

步驟1、對(duì)照品溶液的制備；

步驟2、養(yǎng)血清腦顆粒制劑供試品溶液的制備；

步驟3、將對(duì)照品溶液和供試品溶液注入超高效液相色譜儀，得到色譜圖；

步驟4、根據(jù)色譜圖計(jì)算供試品溶液中4種酚酸類成分含量,

其特征在于

檢測(cè)樣品采用50~100%的甲醇提取，色譜條件為采用C18色譜柱，流動(dòng)相為甲酸乙腈-甲酸水溶液，檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中，步驟1對(duì)照品溶液的制備是將咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品配制成溶液以便用于超高效液相色譜儀。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中所述對(duì)照品溶液的制備方法是：稱取咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，分別用70-80%甲醇配制成200-250μg/mL的咖啡酸溶液，200-250μg/mL的阿魏酸溶液，250-300μg/mL的綠原酸溶液，200-250μg/mL的迷迭香酸溶液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中所述對(duì)照品溶液的制備方法是：準(zhǔn)確稱定咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品置于10mL容量瓶中以75%甲醇定容至刻度，分別得220μg/mL咖啡酸，232μg/mL阿魏酸，271μg/mL綠原酸，219μg/mL迷迭香酸溶液，置于4℃冰箱待用。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中所述供試品溶液的制備方法是：稱量約0.25-0.75g養(yǎng)血清腦顆粒制劑，用70-80%甲醇提取，提取液過濾，濾液配制成10ml的溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，其中所述供試品溶液的制備方法是：分別稱量約0.5g各不同批次養(yǎng)血清腦顆粒制劑，置于10mL容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，超聲提取15min，放至室溫后，以75%甲醇補(bǔ)足至刻度，用0.45微孔濾膜濾過，棄去初濾液取續(xù)濾液做為制劑供試品溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，步驟3、色譜條件如下：采用ACQUITY?UPLC?HSS?T3（100mm×2.1mm,1.8μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.01%甲酸乙腈溶液（A）-0.01%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0~2min，10%A;2～10min，10%A→25%A;10～12min，25%A;12~15min，25%A~90%A;15~17min，90%A～10%A;17~20min，10%A），體積流量0.4mL/min，柱溫25～35℃，進(jìn)樣量1.5～2.5μL，檢測(cè)波長(zhǎng)300～350nm。

8.如權(quán)利要求1-7所述的檢測(cè)方法，其特征在于，綠原酸、咖啡酸、阿魏酸和迷迭香酸的保留時(shí)間分別為2.2~2.8min、3.1~3.7min、6.5~7.1min和9.5~10.1min。

9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，

其中步驟1所述對(duì)照品溶液的制備方法是：稱取咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，分別用70-80%甲醇配制成200-250μg/mL的咖啡酸溶液，200-250μg/mL的阿魏酸溶液，250-300μg/mL的綠原酸溶液，200-250μg/mL的迷迭香酸溶液，

其中步驟2所述供試品溶液的制備方法是：稱量約0.25-0.75g養(yǎng)血清腦顆粒制劑，用70-80%甲醇提取，提取液過濾，濾液配制成10ml的溶液，

其中步驟3的色譜條件如下：采用ACQUITY?UPLC?HSS?T₃（100mm×2.1mm,1.8μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.01%甲酸乙腈溶液（A）-0.01%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0~2min，10%A;2～10min，10%A→25%A;10~12min，25%A;12~15min，25%A~90%A;15~17min，90%A～10%A;17~20min，10%A），體積流量0.4mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量2μL，檢測(cè)波長(zhǎng)325nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其特征在于，

其中步驟1所述對(duì)照品溶液的制備方法是：準(zhǔn)確稱定咖啡酸、阿魏酸、綠原酸和迷迭香酸這四種已知產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品置于10mL容量瓶中以75%甲醇定容至刻度，分別得220μg/mL咖啡酸，232μg/mL阿魏酸，271μg/mL綠原酸，219μg/mL迷迭香酸溶液，置于4℃冰箱待用，

其中步驟2所述供試品溶液的制備方法是：分別稱量約0.5g各不同批次養(yǎng)血清腦顆粒制劑，置于10mL容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，超聲提取15min，放至室溫后，以75%甲醇補(bǔ)足至刻度，用0.45微孔濾膜濾過，棄去初濾液取續(xù)濾液做為制劑供試品溶液，其中步驟3的色譜條件如下：采用ACQUITY?UPLC?HSS?T₃（100mm×2.1mm,1.8μm）色譜柱，流動(dòng)相為0.01%甲酸乙腈溶液（A）-0.01%甲酸水溶液（B），梯度洗脫（0~2min，10%A;2～10min，10%A→25%A;10～12min，25%A;12~15min，25%A~90%A;15~17min，90%A~10%A;17~20min，10%A），體積流量0.4mL/min，柱溫30℃，進(jìn)樣量2μL，檢測(cè)波長(zhǎng)325nm。