[發(fā)明專利]陰道毛滴蟲和白色念珠菌雙通道熒光PCR檢測方法及其試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210136748.5 | 申請日： | 2012-05-04 |
| 公開（公告）號： | CN102719529A | 公開（公告）日： | 2012-10-10 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 劉巨波;熊麗娟;張陸明;張穎 | 申請（專利權(quán)）人： | 遼寧科駿生物有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/725 |
| 代理公司： | 北京北翔知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11285 | 代理人： | 張廣育;姜建成 |
| 地址： | 117004 遼寧省本溪市本溪*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 陰道 滴蟲 白色 念珠菌 雙通道 熒光 pcr 檢測 方法 及其 試劑盒 | ||
1.用于對陰道毛滴蟲和白色念珠菌進行雙通道熒光檢測的引物和TaqMan探針，所述引物和TaqMan探針是根據(jù)陰道毛滴蟲的保守區(qū)設(shè)計的陰道毛滴蟲引物和陰道毛滴蟲TaqMan探針，以及根據(jù)白色念珠菌的保守區(qū)設(shè)計的白色念珠菌引物和白色念珠菌TaqMan探針。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述陰道毛滴蟲引物是SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2，所述陰道毛滴蟲TaqMan探針是SEQ?ID?NO：3；所述白色念珠菌引物是SEQID?NO：4和SEQ?ID?NO：5，并且所述白色念珠菌TaqMan探針是SEQ?ID?NO：6。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述陰道毛滴蟲引物是SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：14，所述陰道毛滴蟲TaqMan探針是SEQ?ID?NO：12，所述白色念珠菌引物是SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5，并且所述白色念珠菌TaqMan探針是SEQ?ID?NO：6。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述陰道毛滴蟲TaqMan探針為經(jīng)過熒光標記的，其5’端標記有第一報告熒光基團，3’端標記有淬滅熒光基團;所述白色念珠菌TaqMan探針為經(jīng)過熒光標記的，其5’端標記有第二報告熒光基團，3’端標記有淬滅熒光基團。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的引物和TaqMan探針，其特征在于：所述第一報告熒光基團為FAM，所述第二報告熒光基團為HEX，所述熒光淬滅基團為BHQ2。
6.一種用于檢測陰道毛滴蟲和白色念珠菌的雙通道熒光PCR檢測方法，所述方法包括以權(quán)利要求1-5任一項所述的引物和TaqMan探針進行實時熒光定量PCR的步驟。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙通道熒光PCR檢測方法，其特征在于：所述實時熒光定量PCR反應(yīng)條件為：先逆轉(zhuǎn)錄50℃30min；然后預(yù)變性95℃5min；最后擴增95℃5sec，55℃40sec，共40個循環(huán)。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雙通道熒光PCR檢測方法，其特征在于：當所述陰道毛滴蟲TaqMan探針以FAM標記且所述白色念珠菌TaqMan探針以HEX標記時，在每個循環(huán)的延伸結(jié)束時收集FAM和HEX熒光信號。
9.一種用于對陰道毛滴蟲和白色念珠菌進行熒光PCR檢測的試劑盒，所述試劑盒包括權(quán)利要求1－5任一項所述的引物和TaqMan探針。
10.權(quán)利要求9的試劑盒，還包括DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、緩沖液和無菌水。
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