[發明專利]一種生殖細胞的誘導方法

有效

• 申請號: 201210135878.7
• 申請日: 2012-05-04
• 公開（公告）號: CN103382456A
• 公開（公告）日: 2013-11-06
• 發明（設計）人: 賴東梅;王方圓;程蔚蔚;陳一飛;羅欣;王麗;董張麗;楊麗娟
• 申請（專利權）人: 中國福利會國際和平婦幼保健院
• 主分類號: C12N5/075
• 分類號: C12N5/075
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

1.一種生殖細胞的誘導方法，其特征在于，它是利用卵泡液誘導羊水細胞或皮膚細胞分化為生殖細胞。

2.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，所述的羊水細胞經分離和培養為類胚體后再誘導分化為生殖細胞。

3.根據權利要求2所述的誘導方法，其特征在于，所述的羊水細胞是按照下述方法分離和培養的：采集羊水標本，獲取羊水細胞進行原代培養，原代培養5d后第一次換液，至細胞生長至90%密度后傳代，挑取羊水細胞克隆，用類胚體培養液重懸，調整細胞密度為1×10⁴/ml，培養1d后搖動培養皿，隔日換液。

4.根據權利要求1所述的誘導方法，其特征在于，所述的皮膚細胞取材于再次剖宮產或進行婦科手術的患者老疤。

5.根據權利要求4所述的誘導方法，其特征在于，所述的皮膚細胞是經過下述方法處理后再被誘導分化為生殖細胞的：取皮膚細胞標本，PBS沖洗除去血細胞，以終濃度0.2?U/ml?膠原酶I、100?U/ml?透明質酸酶進行消化，37℃消化30?min，吹打，100目篩子過濾，1500?rpm離心，棄上清，以1×10⁴/cm²接種在培養皿，無血清懸浮培養2-3d。

6.根據權利要求1-5任一所述的誘導方法，其特征在于，所述的卵泡液中卵泡液原液和標準EB培養基的體積比為1∶20。

7.根據權利要求6所述的誘導方法，其特征在于，所述的卵泡液原液是經以下方法獲得的：收集卵泡液標本，混勻，室溫下4?000?r/min離心5?min，取上清，0.22μm過濾。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的卵泡液誘導羊水細胞或皮膚細胞分化為生殖細胞的誘導時間為1-2周。

9.卵泡液在誘導羊水細胞或皮膚細胞分化獲得生殖細胞中的應用。