[發明專利]一種含LoxP-FRT重組酶位點的植物雙元表達載體

有效

• 申請號: 201210135202.8
• 申請日: 2012-05-02
• 公開（公告）號: CN102676579A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 姚磊;閆曉紅;王慧;馬榮才
• 申請（專利權）人: 北京農業生物技術研究中心
• 主分類號: C12N15/84
• 分類號: C12N15/84;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種載體，為環狀雙鏈DNA分子，自5’末端至3’末端依次包括大腸桿菌復制起始原點ColE1、農桿菌復制起始原點Rep-ori、調節蛋白Rep表達框、T-DNA超驅動區、T-DNA右邊界、T-DNA左邊界和Kan抗性基因表達框。

2.根據權利要求1所述的載體，其特征在于：

所述大腸桿菌復制起始原點ColE1為序列表中序列4自5’末端第1-589位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述農桿菌復制起始原點Rep-ori為序列表中序列4自5’末端第590-1385位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述調節蛋白Rep表達框為序列表中序列4自5’末端第1386-2367位核苷酸所示的雙鏈DNA片段。

所述Kan抗性基因表達框為序列表中序列4自5’末端第2448-3694位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述T-DNA超驅動區為序列表中序列4自5’末端第2368-2391位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述T-DNA左邊界為序列表中序列4自5’末端第2423-2477位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述T-DNA右邊界為序列表中序列4自5’末端第2392-2416位核苷酸所示的雙鏈DNA片段。

3.根據權利要求1或2所述的載體，其特征在于：

在所述T-DNA右邊界和所述T-DNA左邊界之間還包括內酶切識別位點1；

所述內酶切識別位點1具體為MluI的識別位點。

4.根據權利要求1-3中任一所述的載體，其特征在于：

所述載體的核苷酸序列為序列表中的序列4。

5.根據權利要求1-3中任一所述的載體，其特征在于：

在所述T-DNA右邊界和所述T-DNA左邊界之間還包括含有植物篩選標記基因表達框的片段，

所述含有植物篩選標記基因表達框的片段自5’末端至3’末端依次包括多克隆酶切識別位點、右側LoxP-FRT融合位點、植物篩選標記基因表達框和左側LoxP-FRT融合位點。

6.根據權利要求5所述的載體，其特征在于：

所述多克隆酶切識別位點為22個內切酶識別位點，所述22個內切酶識別位點自5’末端至3’末端具體依次為DraI識別位點、PmeI識別位點、NruI識別位點、識別位點甲、識別位點乙、EcoO109I識別位點、XhoI識別位點、PspXI識別位點、SalI識別位點、ClaI識別位點、HindIII識別位點、EcoRV識別位點、EcoRI識別位點、PstI識別位點、識別位點丙、BamHI識別位點、SpeI識別位點、NotI識別位點、AleI識別位點、SacI識別位點、MfeI識別位點、AgeI識別位點；

所述識別位點甲為KpnI位點或Acc651識別位點；

所述識別位點乙為ApaI位點或PspOMI識別位點；

所述識別位點丙為SmaI位點或XmaI的識別位點；

所述植物篩選標記基因表達框為NotII基因表達框、Hyg基因表達框或Bar基因表達框。

7.根據權利要求5或6所述的載體，其特征在于：

所述左側LoxP-FRT融合位點為序列表中序列1自5’末端第4016-4083位核苷酸所示的雙鏈DNA片段或序列2的自5’末端第4247-4314位所示的雙鏈DNA片段或序列3的自5’末端第3773-3840位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述右側LoxP-FRT融合位點為序列表中序列1自5’末端第2564-2631位核苷酸所示的雙鏈DNA片段或序列2的自5’末端第2564-2631位核苷酸所示的雙鏈DNA片段或序列3的自5’末端第2564-2631位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述NptII基因表達框為序列表中序列1自5’末端第2650-4007位核苷酸所示的雙鏈DNA片段；

所述Hyg基因表達框為序列表中序列2自5’末端第2650-4238位所示的雙鏈DNA片段；

所述Bar基因表達框為序列表中序列3自5’末端第2650-3764位所示的雙鏈DNA片段。