[發明專利]一種螺旋藻多糖及其提取方法

有效

• 申請號: 201210134354.6
• 申請日: 2012-05-03
• 公開（公告）號: CN102633901A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 丁侃;李俊;姚健;倪鑫淼
• 申請（專利權）人: 昆明振華制藥廠有限公司;中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00;A61P3/10;A61P37/04;A61P39/06
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及一種螺旋藻多糖及其提取方法。

背景技術

????螺旋藻是一類低等植物，屬于藍藻門，顫藻科。它們與細菌一樣，細胞內沒有真正的細胞核，所以又稱藍細菌。藍藻的細胞結構原始，且非常簡單，它生長于水體中，在顯微鏡下可見其形態為螺旋絲狀。?有關螺旋藻多糖抗腫瘤活性研究已有報道，但多數為粗多糖，抗腫瘤活性是來源于哪種多糖，其明確結構如何，未見報道。????

發明內容

本發明的目的是提供一種螺旋藻多糖以及它的提取方法。

本發明的技術方案為：

螺旋藻多糖的提取方法按以下步驟進行：

????1）取螺旋藻生藥材（5?kg），加質量濃度?95%工業乙醇室溫下浸泡七天，傾去乙醇，固體物晾干，然后用沸水進行多次提取，每次提取時間為4小時，用苯酚-硫酸法檢測提取液的糖含量，至糖反應不明顯為止，每次的提取液經過濾后合并，加熱濃縮至小體積，對流動水透析2天，透析內液濃縮后離心，加入質量濃度30%的三氯乙酸(體積比，1：1?v/v)?溶液去除蛋白，在4度條件下反應4小時，加質量濃度10%?NAOH溶液（v/v）中和至pH值為6.5～7.5后，扎袋對流動水透析48小時，透析內液濃縮后離心，上清液加入三倍體積的質量濃度95%工業乙醇，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經無水乙醇和丙酮洗滌后，于80?℃干燥，得水提螺旋藻粗多糖；

2）沸水提取后的固體殘渣在4?℃下用5%?v/v?NaOH溶液浸提3小時，間歇攪拌，過濾，用10%?(?v/v)?HCl溶液中和至pH?6.5～7.5，扎袋對流動水透析2天，透析內液濃縮后離心，上清液加入三倍體積的?(v/v)?95%工業乙醇沉淀，靜置過夜，離心收集沉淀，分別經無水乙醇和丙酮洗滌后，于80?℃干燥，得堿提螺旋藻粗多糖；

3）水提螺旋藻粗多糖用DEAE-纖維素陰離子交換柱層析進行分離，用去離子水和不同離子強度0.1，0.2，0.3和0.5?mol/L的NaCl溶液進行分步洗脫，分別從去離子水、0.1、0.2，0.3和0.5?mol/L?NaCl溶液的洗脫液中分離得到五個組分，洗脫液對去離子水透析，透析內液減壓濃縮并冷凍干燥，所得產物分別命名為LXZ-W，LXZ-0.1，LXZ-0.2，LXZ-0.3，LXZ-0.5，取LXZ-W樣品用0.2mol/L氯化鈉溶解，離心，上清液上S-300凝膠柱，用0.2?mol/L氯化鈉洗脫液洗脫得LXZ-W-300組分，經HPLC檢測為一純多糖，分子量在3～10?×?10^4?Da。

所述的螺旋藻多糖化學結構特征為：主鏈由1,?4-連接α-D-葡萄糖構成，平均每8個主鏈殘基上有一個分支，取代在分支點的6位，分支由1個或2個1?6連接的葡萄糖構成，結構式如下：

?本發明的螺旋藻多糖螺旋藻多糖具有抗腫瘤、α糖苷酶抑制、降糖、NF-KB免疫活性、以及抗氧化等功效。

對S180小鼠肉瘤實驗，發現小鼠口服螺旋藻多糖的水提和堿提部分均有部分抑制腫瘤生長的作用。進一步實驗，用水提多糖的水洗、0.2、0.3、0.5?mol/l?Nacl洗脫對小鼠脾細胞進行增殖實驗的研究，發現水提多糖的水洗脫部分有較強的促進脾細胞增殖的作用，再在體內驗證其組分對S180肉瘤的抑制作用。結果表明，螺旋藻水洗灌胃給藥方式對S180腫瘤有抑制作用，給藥結束時，螺旋藻水提水洗多糖100mg/kg的T/C%為58.95%，腫瘤重量與對照組比較有顯著差異（p?<?0.05）。

用小鼠免疫器官的脾細胞進行免疫細胞的增殖實驗，結果表明：螺旋藻水洗多糖40、200、1000ug/ml均對脾細胞有促進增殖作用，T/C%分別為148.96%、166.89%、182.99%與不加藥組有顯著差異（p?<?0.05）。螺旋藻0.2mol/l?Nacl洗脫多糖8ug/ml和40ug/ml對脾細胞也有促進增值作用，T/C%分別為179.88%和202.81%與不加藥組有顯著差異（p?<?0.05）。

用細胞在內毒素LPS等外界刺激物作用下，LPS通過結合到TLR4?受體后，導致通過MyD88?依賴的和TRIF?的兩條途徑激活NF-κB，實驗時同時給予受試藥物，檢測在藥物作用下是否抑制NF-κB的激活。同時不給予外界刺激，單獨給予藥物處理，檢測在藥物作用下是否激活NF-κB。結果，螺旋藻水提水洗40、200、1000ug/ml劑量組均對NF-κB有抑制，抑制率分別為：99.9%、97.6%和92.0%。