[發明專利]一種快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件及其制成的檢測卡組件和制備方法

有效

• 申請號: 201210133900.4
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102680704A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 羅琪;謝愛武;梁萬興;李必松
• 申請（專利權）人: 廣州鴻琪光學儀器科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

1.一種快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：包括試紙條和與試紙條配合使用且獨立包裝的鉑卟啉標記特異抗體，試紙條包括底襯、依次接合在底襯上的吸水墊、包被分析膜及樣品墊，該包被分析膜上設有檢測線和質控線，檢測線包被的特異抗體為抗微量白蛋白單克隆抗體，質控線包被的特異抗體為兔IgG抗體；鉑卟啉標記特異抗體為抗微量白蛋白單克隆抗體和抗兔IgG抗體。

2.根據權利要求1所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：所述試紙條的所述底襯一面涂覆黏膠或雙面膠，用于固定所述吸水墊、包被分析膜及樣品墊，其中所述包被分析膜粘附在所述底襯的中間，所述底襯的兩側分別與所述吸水墊和樣品墊連接。

3.根據權利要求1或2所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：所述試紙條的所述吸水墊為一種濾紙，該濾紙為吸水紙或濾油紙；所述吸水墊粘附在所述底襯上，同時所述吸水墊與所述包被分析膜重疊1-2mm連接。

4.根據權利要求1或2所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：所述包被分析膜由硝酸纖維素膜組成，所述包被分析膜上噴涂抗微量白蛋白單克隆抗體和兔IgG抗體。

5.根據權利要求1或2所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：所述樣品墊為磷酸鹽緩沖液浸泡過的玻璃纖維膜，所述樣品墊與所述包被分析膜重疊1-2mm連接。

6.根據權利要求1或2所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：所述獨立包裝的鉑卟啉標記特異抗體為抗微量白蛋白單克隆抗體和抗兔IgG抗體，并用含如下組分的0.01-0.1M磷酸鹽緩沖液稀釋后用塑料瓶密封而得：5％-20％甘油、1％-5％牛血清白蛋白、0.1-2％甘氨酸和0.01％-0.05％表面活性劑。

7.根據權利要求1所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件，其特征在于：所述獨立包裝的鉑卟啉標記的激發光光源波長范圍為390-420nm，發射光波長范圍為600nm-700nm。

8.一種制備權利要求1所述的快速定量檢測微量白蛋白的免疫熒光試紙條組件的方法，其特征在于：它包括以下步驟：

1)抗體的制備：

選用純化的基因工程表達的抗微量白蛋白單克隆抗體、抗兔IgG抗體和純化的兔IgG抗體；

2)包被分析膜的制備：

采用噴膜機分別在一硝酸纖維膜上劃檢測線和質控線，劃線細致均勻，檢測線與質控線間隔5mm；

用檢測線包被緩沖液稀釋抗微量白蛋白單克隆抗體至濃度為5-20ug/ml，采用噴膜機將抗微量白蛋白單克隆抗體噴印在硝酸纖維膜的檢測線上；

用質控線包被緩沖液稀釋純化的兔IgG抗體至濃度為5-20ug/ml，采用噴膜機將純化的兔IgG抗體噴印在硝酸纖維膜的質控線上；

將噴膜后的硝酸纖維膜放入30-50℃的真空干燥箱內，干燥后取出密封備用；

3)樣品墊的制備：

用含0.01％-0.5％聚乙二醇、1％-5％牛血清白蛋白、0.01％-0.05％表面活性劑的0.01-0.1M磷酸鹽緩沖液浸泡，緩沖液PH為7.2-7.6，浸泡處理后，將樣品墊放入65℃的真空干燥箱內，干燥40-60分鐘后取出密封備用；

4)免疫熒光試紙條的制備：

先將包被分析膜粘附在底襯中間位置上，在包被分析膜一端粘附吸水墊，二者重疊1-2mm；在包被分析膜另一端粘附樣品墊，二者重疊1-2mm；再將黏貼好包被分析膜、吸水墊和樣品墊的底襯裁切成細條；

5)鉑卟啉標記特異抗體的制備：

將抗微量白蛋白單克隆抗體和抗兔IgG抗體，分別用0.05-0.2M、pH9.5-11.0碳酸氫鈉溶液稀釋至1-2mg/ml，分別加入適量的鉑卟啉溶解液，攪勻，室溫孵育1-2小時，孵育過程中每隔15-20分鐘分別混勻一次，最后分別用規格型號為G25的凝膠柱過柱分離純化，分別收集鉑卟啉標記好的抗微量白蛋白單克隆抗體和抗兔IgG抗體，各自用0.01-0.1M、pH7.2-7.6磷酸鹽緩沖液稀釋混勻后于-20℃保存；

6)獨立包裝的鉑卟啉標記特異抗體工作液的制備：

按照需要確定適當濃度的鉑卟啉標記的抗微量白蛋白單克隆抗體和抗兔IgG抗體，采用含5％-20％甘油、1％-5％牛血清白蛋白、0.1-2％甘氨酸、0.01％-0.05％表面活性劑的0.01-0.1M磷酸鹽緩沖液一并稀釋，分裝在塑料試劑瓶中并密封瓶蓋，其中每個塑料試劑瓶的分裝量為0.3-3ml，在2-8℃下保存。