[發(fā)明專利]一種miRNA檢測(cè)探針和可視化檢測(cè)miRNA的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210133660.8
• 申請(qǐng)日: 2012-05-03
• 公開（公告）號(hào): CN102618664A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周翔;王少儒;田沺;翁小成;肖珩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢科皓知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 42222
• 代理人: 汪俊鋒

1.一種miRNA檢測(cè)探針，其特征在于，包括三個(gè)部分：靠近3'端為G-四鏈體形成序列，中間是待測(cè)靶標(biāo)互補(bǔ)序列，?5'端為干擾序列；

所述G-四鏈體形成序列含有4段GGG序列參與G-四鏈體形成；

所述待測(cè)靶標(biāo)互補(bǔ)序列為loop環(huán)，與相應(yīng)的靶miRNA完全互補(bǔ)；

所述干擾序列有5-10個(gè)與G-四鏈體形成序列互補(bǔ)的堿基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的miRNA檢測(cè)探針，其特征在于，干擾序列的長(zhǎng)度為8個(gè)堿基。

3.含有權(quán)利要求1或2所述miRNA檢測(cè)探針的試劑盒。

4.一種可視化檢測(cè)miRNA的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）、根據(jù)待測(cè)miRNA設(shè)計(jì)合成權(quán)利要求1或2所述的miRNA檢測(cè)探針；

2）、將合成的miRNA檢測(cè)探針與待測(cè)miRNA互補(bǔ)配對(duì)，并加入雙鏈特異內(nèi)切酶，通過(guò)酶切釋放出G-四鏈體；

3）、加入鈉鉀離子，并與Hemin共同培育，然后通過(guò)過(guò)氧化物酶所催化的顯色反應(yīng)，來(lái)檢測(cè)相應(yīng)靶miRNA。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測(cè)方法，其特征在于，待測(cè)miRNA為miR141。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于，miRNA檢測(cè)探針干擾序列的長(zhǎng)度設(shè)置為8個(gè)堿基，miRNA檢測(cè)探針的濃度為1000?nM，雙鏈特異性核酸內(nèi)切酶的用量為0.1U。