[發(fā)明專利]增強(qiáng)納米膠乳免疫比濁法檢測補(bǔ)體Clq濃度的試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210133492.2
• 申請(qǐng)日: 2012-04-28
• 公開（公告）號(hào): CN102650641A
• 公開（公告）日: 2012-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊杰;朱曉敏;朱慧琳;張瑞鎬;王泉龍;劉穎冰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海北加生化試劑有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司 31001
• 代理人: 林煒

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，尤其涉及一種檢測試劑盒，特別是一種采用增強(qiáng)納米膠乳免疫比濁法檢測人血清中和關(guān)節(jié)腔液中補(bǔ)體Clq濃度的試劑盒及其方法。

背景技術(shù)

補(bǔ)體Clq是補(bǔ)體系統(tǒng)Cl的第一組成成份，是一個(gè)巨分子量糖蛋白，一個(gè)Clq分子由18個(gè)多肽鏈成，化學(xué)組成為膠原性蛋白分子量：410KD。現(xiàn)有技術(shù)中采用免疫擴(kuò)散法和ELISA雙抗體夾心技術(shù)測定補(bǔ)體Clq濃度，但是其步驟復(fù)雜，準(zhǔn)確性不高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種增強(qiáng)納米膠乳免疫比濁法檢測補(bǔ)體Clq濃度的試劑盒及方法，所述的這種增強(qiáng)納米膠乳免疫比濁法檢測補(bǔ)體Clq濃度的試劑盒及方法要解決現(xiàn)有技術(shù)中采用免疫擴(kuò)散法和ELISA雙抗體夾心技術(shù)測定補(bǔ)體Clq濃度過程復(fù)雜，準(zhǔn)確性不高的技術(shù)問題。

本發(fā)明提供了一種增強(qiáng)納米膠乳免疫比濁法檢測補(bǔ)體Clq濃度的試劑盒，包括兩種試劑，其特征在于：I試劑由磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、PEG6000-8000、EDTA-NA2和TX-100組成，在I試劑中，所述的磷酸氫二鈉的質(zhì)量濃度為28.6g/L，所述的磷酸二氫鉀的質(zhì)量濃度為2.7g/L，所述的PEG6000的質(zhì)量濃度為50g/L，所述的EDTA-NA2的質(zhì)量濃度為1g/L，所述的TX-100的體積濃度為0.2ml/L，II試劑由兔抗人補(bǔ)體Clq抗血清或羊抗人補(bǔ)體Clq抗血清或鼠抗人補(bǔ)體Clq抗血清或鼠抗人補(bǔ)體Clq單克隆抗體交聯(lián)在膠乳顆粒上懸濁液組成。

進(jìn)一步的，所述的II試劑是通過碳二亞胺反應(yīng)將兔抗補(bǔ)體Clq抗體、或羊抗補(bǔ)體Clq抗體、或鼠抗補(bǔ)體Clq抗體，或鼠抗人補(bǔ)體Clq單克隆抗體、IgG共價(jià)結(jié)合到膠乳顆粒上。

進(jìn)一步的，所述的TX-100的純度為100％。

進(jìn)一步的，所述的兔抗人補(bǔ)體Clq抗血清的效價(jià)為1∶64。

本發(fā)明還提供了一種檢測人血清中補(bǔ)體Clq濃度的方法，采用上述的試劑盒，包括一個(gè)將樣本采用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個(gè)將樣本采用生化分析儀測定的步驟中，將樣本加入I試劑R1后，37℃孵育5min，讀測第1點(diǎn)樣本A1，加入II試劑R2，37℃孵育5min，讀測第2點(diǎn)樣本A2，樣本A＝樣本A2-樣本A1；還包括一個(gè)將校準(zhǔn)品采用生化分析儀測定的步驟，在所述的一個(gè)將校準(zhǔn)采用生化分析儀測定的步驟中，將校準(zhǔn)加入I試劑R1后，37℃孵育5min，讀測第1點(diǎn)校準(zhǔn)A1，加入II試劑R2，37℃孵育5min，讀測第2點(diǎn)校準(zhǔn)A2，校準(zhǔn)A＝校準(zhǔn)A2-校準(zhǔn)A1；

結(jié)果計(jì)算：

上述測定的參數(shù)為：溫度37℃，主波長546nm或600nm、副波長700nm，樣本或校準(zhǔn)品3-4μl，R₁：240μl，R₂：60μl，反應(yīng)時(shí)間為10分鐘。

本發(fā)明的兔抗人補(bǔ)體Clq抗血清或羊抗人補(bǔ)體Clq抗血清或鼠抗人補(bǔ)體Clq抗血清或鼠抗人補(bǔ)體Clq單克隆抗體可以在市場購買，也可以通過常規(guī)的免疫方法制備。

本發(fā)明的試劑盒和方法是采用增強(qiáng)納米膠乳免疫比濁法的測定原理，即利用補(bǔ)體Clq抗原和交聯(lián)在乳膠顆粒上的兔抗人補(bǔ)體Clq抗血清、羊抗人補(bǔ)體Clq抗血清、鼠抗人補(bǔ)體Clq抗血清、鼠抗人補(bǔ)體Clq單克隆抗體相結(jié)合，形成不溶性免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液產(chǎn)生渾濁，其濁度高低，即透光度減少、吸光度增加反映人血清樣本中補(bǔ)體Clq的濃度，補(bǔ)體Clq的濃度可由校準(zhǔn)品所作的劑量反應(yīng)曲線算出。

采用本發(fā)明的試劑盒和方法測得的CLq的濃度可以作為科研和教學(xué)使用。

本發(fā)明和已有技術(shù)相比，其技術(shù)進(jìn)步是顯著的。本發(fā)明的試劑盒和方法用于測定補(bǔ)體Clq濃度的過程簡單方便，準(zhǔn)確性高。

附圖說明

圖1是由校準(zhǔn)品所作的補(bǔ)體Clq濃度和吸光度的劑量反應(yīng)曲線圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

1.1適用儀器

半自動(dòng)、全自動(dòng)生化分析儀。

1.2分析方法

增強(qiáng)納米乳膠免疫比濁法。

1.3性能要求

1.3.1試劑外觀

R1：無色澄清透明液體；

R2：淡黃色澄清液體或膠乳懸液。

1.3.2試劑空白吸光度(A)

吸光度(A)：R₁+R₂≤0.04A(在溫度37℃；主波長546nm、600nm(副波長700nm))。

1.3.3精密度

1.3.3.1批內(nèi)精密度

CV≤10％。