[發(fā)明專利]注射用丹參多酚酸中鞣質(zhì)類物質(zhì)的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210132467.2
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN103376300A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設計）人: 葉正良;薛靜;李德坤;周大錚
• 申請（專利權(quán)）人: 天津天士力之驕藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 北京華科聯(lián)合專利事務所 11130
• 代理人: 王為

1.一種丹參多酚酸中鞣質(zhì)類物質(zhì)的檢測方法，其特征在于，步驟如下：

步驟1，取沒食子酸、兒茶素、鞣花酸對照品適量，分別制成相應的對照品溶液；

步驟2，取丹參多酚酸溶于丙酮，得水解前未水解樣品溶液；

步驟3，取丹參多酚酸溶于丙酮，加酸水解，得水解樣品溶液；

步驟4，采用C₁₈色譜柱，流動相甲醇-磷酸水溶液等度洗脫，檢測器為紫外檢測器，測定未水解樣品溶液、水解樣品溶液及對照品中的沒食子酸；

步驟5，采用C₁₈色譜柱，流動相甲醇-磷酸水溶液梯度洗脫，檢測器為紫外檢測器測定未水解樣品溶液、水解樣品溶液及對照品中的兒茶素；

步驟6，采用C₁₈色譜柱，流動相乙腈-磷酸水溶液等度洗脫，檢測器為紫外檢測器測定未水解樣品溶液、水解樣品溶液及對照品中的鞣花酸；

步驟7，比較未水解樣品溶液和水解樣品溶液與對照品溶液的色譜圖判斷丹參多酚酸溶液中是否存在鞣質(zhì)類成分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

步驟1對照品溶液的制備，方法如下：

分別精密稱取沒食子酸、兒茶素、鞣花酸對照品適量，分別加甲醇制成相應的對照品溶液，得沒食子酸質(zhì)量濃度為0.5451mg.mL^-1、兒茶素質(zhì)量濃度為0.5079mg.mL^-1、鞣花酸質(zhì)量濃度為0.5067mg.mL^-1的對照品溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

步驟2未水解樣品溶液的制備

精密稱定丹參多酚酸0.1g，溶于10ml60％的丙酮中，超聲30min，0.22um微孔濾膜過濾，即得。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

步驟3水解樣品溶液的制備

精密稱定丹參多酚酸0.1g，溶于5ml?60％的丙酮中，再加入5ml?2mol/L的鹽酸溶液，于100℃水解4h，后用60％丙酮補加溶劑到10ml，0.22um微孔濾膜過濾，即得。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，

沒食子酸液相色譜條件：色譜柱為C18；流動相為：2∶98-40∶60的甲醇-磷酸水溶液，其中磷酸水溶液中磷酸含量為0.01-0.1％，住溫：25-35℃，檢測波長為256-280nm。

6.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

沒食子酸液相色譜條件：色譜柱為C18；流動相為5∶95的甲醇-0.05％磷酸水溶液等度洗脫，流速為0.8mL.min^-1；柱溫30℃；檢測波長271nm。

7.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

兒茶素液相色譜條件：色譜柱為C18；流動相為甲醇-0.05％磷酸水溶液梯度洗脫，

流速為0.8mL.min^-1；柱溫30℃；檢測波長271nm，梯度洗脫條件如下：

8.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

鞣花酸液相色譜條件：色譜柱為C18；流動相為10∶90-40∶60的乙腈-磷酸水溶液，其中磷酸水溶液中磷酸含量為0.05-1.5％，柱溫：25-50℃，檢測波長為240-270nm。

9.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

鞣花酸液相色譜條件：譜柱為C18；流動相為18∶82的乙腈-0.2％磷酸溶液，流速為1.0mL.min^-1；柱溫40℃；檢測波長254nm。

10.根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于，其中

步驟1，2，3得到的溶液分別進樣，進樣方法如下：

第一組：取沒食子酸標準品、水解前樣品、水解后樣品分別進樣檢測；

第二組：取兒茶素標準品、水解前樣品、水解后樣品分別進樣檢測；

第三組：取水解后樣品、水解后樣品加兒茶素標準品5滴、水解后樣品加兒茶素15滴分別進樣檢測；

第四組：取鞣花酸標準品、水解前樣品、水解后樣品分別進樣檢測；

第五組：取水解后樣品、水解后樣品加鞣花酸標準品5滴、水解后樣品加鞣花酸標準品15滴分別進樣檢測。