[發(fā)明專利]多態(tài)性檢測用探針、多態(tài)性檢測方法、藥效判定方法以及多態(tài)性檢測用試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210132135.4
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102766682A
• 公開（公告）日: 2012-11-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 井口亞希
• 申請（專利權(quán)）人: 愛科來株式會社
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京東方億思知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11258
• 代理人: 肖善強

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及多態(tài)性檢測用探針、多態(tài)性檢測方法、藥效判定方法以及多態(tài)性檢測用試劑盒。?

背景技術(shù)

ABCC2基因局部存在于肝細(xì)胞的膽管，對將谷胱甘肽、葡萄糖醛酸、硫酸結(jié)合體從膽管輸送到膽管的轉(zhuǎn)運體進行編碼，并與各種藥劑的代謝有關(guān)。?

另外，近年，在分析日本人的ABCC2基因的單核苷酸多態(tài)性(SNPs)之后，發(fā)現(xiàn)了各種各樣的基因多態(tài)性。另外，已給出了通過對ABCC2基因的與5’末端相距24個堿基的胞嘧啶(C)突變成胸腺嘧啶(T)的C-24T進行測定有可能能夠預(yù)測藥物耐受性的啟示(參見Drug?Metabolism?and?Disposition，2002年，Vol.30，No.4，p.363-364)。因此，人們期待正確且短時間、低成本并且簡便地測定ABCC2基因的多態(tài)性的方法。?

另外，作為與藥劑的敏感性相關(guān)的突變，例如，除了C-24T突變之外，還已知有MDR1基因的外顯子26中的第3435位的胞嘧啶(C)突變成胸腺嘧啶(T)的C3435T突變等多種突變(參見日本專利特許第4454366號公報)。因此，不單單檢測ABCC2基因的多態(tài)性，而是通過與C-24T突變一起檢測其他的與藥劑敏感性相關(guān)的突變體，有可能能夠更高靈敏度地預(yù)測藥劑耐受性。?

目前，作為測定基因的多態(tài)性的方法，已知有下述的方法：使用被設(shè)計為擴增含有想要測定的堿基的部分的引物進行PCR，用可以該特定堿基中有無突變來區(qū)分是否切斷的限制性內(nèi)切酶進行切斷，之后通過電泳檢測?有沒有被切斷(PCR-RFLP法)(參見Genet.Mol.Res.，2010年，第9卷，第1號，p.34-40)。?

另外，還已知有下述的方法：在用PCR法擴增含有突變的區(qū)域之后，使用用熒光染料標(biāo)記了的核酸探針進行熔解曲線分析，并基于熔解曲線分析的結(jié)果來分析堿基序列的突變(參見特開2002-119291號公報)。?

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明要解決的問題?

但是，ABCC2基因的突變中如上述那樣存在各種突變。因此，在PCR-RFLP法中，需要在PCR反應(yīng)之后提取擴增產(chǎn)物來進行限制性內(nèi)切酶處理。因此，擴增產(chǎn)物有可能混入下一反應(yīng)體系中，由此有時會獲得假陽性、假陰性的結(jié)果。另外，由于在PCR結(jié)束之后用限制性內(nèi)切酶進行處理，之后進行電泳，因此有時到檢測為止所需的時間非常長。而且，由于操作復(fù)雜，因此難以自動化。?

根據(jù)這些現(xiàn)狀，期待進一步開發(fā)用于檢測ABCC2基因多態(tài)性的技術(shù)。?

本發(fā)明要解決的問題在于提供一種能夠高靈敏度、簡便地檢測ABCC2基因多態(tài)性的多態(tài)性檢測用探針、使用該探針的多態(tài)性檢測方法。另外，本發(fā)明要解決的問題在于提供使用了該多態(tài)性檢測方法的藥效判定方法。而且本發(fā)明要解決的問題在于提供使用了該多態(tài)性檢測用探針的多態(tài)性檢測用試劑盒。?

用于解決課題的手段?

本發(fā)明如下所述。?

<1>一種多態(tài)性檢測用探針，其為從包括下述P1和P1’的組中選擇的一種熒光標(biāo)記寡核苷酸，用于檢測ABCC2基因的多態(tài)性，?

(P1)熒光標(biāo)記寡核苷酸，其為含有序列編號1所示的序列中的第207位～第217位的堿基的堿基長為11～60的序列，該序列除了與序列編號1中的第217位的堿基對應(yīng)的堿基為胞嘧啶之外相對于具有與序列編號1相同的堿基的堿基序列具有至少80％以上的同一性，并且與序列編號1?所示的序列中的第217位的堿基對應(yīng)的堿基用熒光染料標(biāo)記；以及?

(P1’)熒光標(biāo)記寡核苷酸，其為含有序列編號1所示的序列中的第207位～第217位的堿基的堿基長為11～60的序列，該序列除了與序列編號1中的第217位的堿基對應(yīng)的堿基為胞嘧啶之外與具有和序列編號1相同的堿基的堿基序列的互補鏈在嚴(yán)謹(jǐn)條件下雜交，并且與序列編號1所示的序列中的第217位的堿基對應(yīng)的堿基用熒光染料標(biāo)記。?

<2>根據(jù)<1>所述的多態(tài)性檢測用探針，其中，所述多態(tài)性檢測用探針是下述P1或下述P1’的所述熒光標(biāo)記核苷酸，?

(P1-1)熒光標(biāo)記寡核苷酸，其為含有序列編號1所示的序列中的第207位～第217位的堿基的堿基長為11～60的序列，該序列除了與序列編號1的第217位的堿基對應(yīng)的堿基為胞嘧啶之外相對于具有與序列編號1相同的堿基的堿基序列具有至少80％以上的同一性，并且與序列編號1所示的序列中的第217位的堿基對應(yīng)的堿基用熒光染料標(biāo)記，并且該熒光標(biāo)記寡核苷酸識別序列編號1的第207位的堿基的多態(tài)性；或者?