[發明專利]增血壓素固相合成工藝及其中間體和應用

有效

• 申請號: 201210131066.5
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN103374058A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 黃臻輝;丁金國;江錫銘;洪勇;霍建麗;琚姝
• 申請（專利權）人: 上海第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P9/00
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

技術領域

本發明屬于藥物合成工藝領域。更具體地，本發明涉及一種增血壓素的固相合成工藝及其中間體和應用。

背景技術

增血壓素為增血壓藥，CAS登記號53-73-6，英文名angiotensinamide或[Asn¹，Val⁵]-angiotensin?II，化學結構為H-Asn-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe-OH(2003版國家藥品標準WS-10001-(HD-1448)-2003)。增血壓素用于外傷或手術后休克和全身麻醉或腰椎麻醉時所致的低血壓癥等，可預防或治療圍手術期低血壓，作為急救用藥治療休克期低血壓，也可用于治療血管緊張素轉換酶抑制劑用藥過量且常規治療無效時。

在心血管穩態平衡受到威脅時，神經激素機制-包括交感神經系統、血管加壓素系統和腎素血管緊張素系統被激活，導致血管收縮保持血壓和關鍵器官血流。在低血壓(包括脫水和出血)狀態下兒茶酚胺、血管緊張素和加壓素在調節動脈血壓方面起關鍵作用。增血壓素藥物為化學合成的血管緊張素II類似物，兩者藥理作用類似。增血壓素能直接興奮小動脈血管平滑肌，使小動脈強力收縮，從而迅速升高血壓。增血壓素主要作用于皮膚、內臟和腎臟血管以增加外周阻力，對骨骼肌及腦血管的收縮作用較小，對心肌的興奮作用微弱，無顯著的靜脈收縮效應。增血壓素還可促進腎上腺皮質分泌甾體激素醛固酮，醛固酮作用于腎小管，起保鈉、保水、排鉀作用，從而引起血量增多，血壓升高；醛固酮還會作用于下丘腦，下丘腦分泌激素促使垂體釋放抗利尿激素(加壓素)，促進腎小管對水分的重吸收。增血壓素經氨肽酶作用后將N端Asn去除形成七肽血管緊張素III，血管緊張素III的縮血管作用較弱，但促進醛固酮分泌的作用卻強于增血壓素。增血壓素還會誘導腎上腺髓質和交感神經末端大量釋放兒茶酚胺，兒茶酚胺通過腎上腺素能受體收縮血管、加強心肌收縮而升高血壓。增血壓素有時會引起心率減緩但罕見心律不齊；還會引起冠脈收縮而暫時性損害心肌功能，但持續給藥會改善心室功能。

多肽的化學合成目前主要有液相合成和固相合成兩種方法。液相合成的優點是每步中間產物的合成可以直接進行過程控制，并有機會得以純化；缺點是工藝復雜，占用較多工時與人力，需要較多設備與場地。固相合成工藝簡單，占用工時與人力較少，物料轉移較少而節省設備與場地；其缺點是每步中間產物不可以純化，必須優化各步反應條件使得轉化率接近100％、而且盡可能避免副反應的發生。專利US2978444中描述了一種液相合成增血壓素的方法，該工藝路線運用了聚合式合成策略，具有較高的效率，但以下兩個問題使得該路線較難獲得高純度產品：在肽片段縮合反應中，肽片段C端氨基酸、特別是His容易消旋；該路線中反復使用了皂化反應，在強堿性水溶液中Asn側鏈容易脫酰胺。另外該方法使用了氫化反應，需要特殊設備和工作條件，還要使用較為昂貴的金屬催化劑、且容易導致產品中殘留重金屬問題。更為重要的是，該專利方法無法實現連續合成，需要占用較多生產設備(如反應釜等)與人力、工時。文獻Biochemistry1965，Vol4：2394報道了一種線性合成策略，由于使用了固相合成技術，工藝相對簡單，能夠保證較高的收率。但該路線使用了氯甲基樹脂，最后需要使用氫溴酸將肽鏈從樹脂上解離下來，而且側鏈保護基團硝基和芐基在氫化反應中難以完全解離。

多肽藥物合成工藝的關鍵問題之一是對保護氨基酸消旋的控制(中國藥物雜2010，Vol?19：102)。專利US6015881對抑制縮合反應中保護氨基酸的消旋提供了一種通行的解決方案。該方案認為在低溫下預先活化氨基酸對抑制消旋十分重要。氨基酸按照以下方式預活化：Fmoc保護氨基酸、HOBt、DIPEA在室溫下溶解后冷卻到0-5℃，然后將HBTU加入到上述溶液中攪拌至溶解。HBTU最后加料是因為在其不存在時活化和消旋都不會發生。該方案在生產實施過程中需要有一套獨立的反應釜A用于配料、控溫和活化保護氨基酸，將活化保護氨基酸溶液轉移至縮合反應釜B中，以及隨后的設備清潔工作。更為重要的是，雖然保護氨基酸的OBt酯穩定性良好，但如果在反應釜A中貯存時間稍長，因不能和氨基縮合而走向消旋通路，故而對預活化時間需要嚴格的控制(J.Org.Chem.1997，Vol62：4307)。故而預活化方案增加了合成工藝的復雜度。

綜上所述，現在還缺乏一種高效合成增血壓素的方法，因此仍然迫切需要開發新的增血壓素的生產工藝。

發明內容