[發明專利]增血壓素固相合成工藝及其中間體和應用

有效

• 申請號: 201210131066.5
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN103374058A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 黃臻輝;丁金國;江錫銘;洪勇;霍建麗;琚姝
• 申請（專利權）人: 上海第一生化藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/08;A61P9/00
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 朱水平;沈利

1.一種增血壓素的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

(a)制備保護增血壓素R₁-Asn-Arg(R₂)-Val-Tyr(R₃)-Val-His(R₄)-Pro-Phe-R₅，其中，R₁為氨基保護基，R₂、R₃、R₄為側鏈保護基，R₅為羧基樹脂；

(b)在切割試劑的作用下，步驟(a)所得的保護增血壓素脫保護并和樹脂分離，生成增血壓素H-Asn-Arg-Val-Tyr-Val-His-Pro-Phe-OH。

2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(b)所述的切割試劑為TFA∶TI?S∶H₂O體積比為95∶2.5∶2.5的混合物；R₁、R₂、R₃、R₄、R₅分別為Boc、Pbf、tBu、Trt、Wang樹脂。

3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(a)包括以下步驟：

(1)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑作用下，在助縮合劑的啟動下，氨基Fmoc保護的苯丙氨酸和經過揮發性有機溶劑溶脹處理的羧基樹脂進行縮合反應，得到連接Fmoc保護苯丙氨酸的樹脂，然后將氨基保護基團Fmoc脫除，得到連接苯丙氨酸的樹脂；

(2)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(1)所得的連接苯丙氨酸的樹脂和氨基Fmoc保護的脯氨酸進行縮合反應，然后進行氨基保護基團Fmoc脫除反應，得到連接脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂；

(3)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(2)所得的連接脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂和氨基Fmoc保護側鏈Trt保護的組氨酸進行縮合反應，然后進行氨基保護基團Fmoc脫除反應，得到連接側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂；

(4)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(3)所得的連接側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂和氨基Fmoc保護的纈氨酸進行縮合反應，然后進行氨基保護基團Fmoc脫除反應，得到連接纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂；

(5)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(4)所得的連接纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂和氨基Fmoc保護側鏈tBu保護的酪氨酸進行縮合反應，然后進行氨基保護基團Fmoc脫除反應，得到連接側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂；

(6)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(5)所得的連接側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂和氨基Fmoc保護的纈氨酸進行縮合反應，然后進行氨基保護基團Fmoc脫除反應，得到連接纈氨酸、側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂；

(7)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(6)所得的連接纈氨酸、側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂和氨基Fmoc保護側鏈Pbf保護的精氨酸進行縮合反應，然后進行氨基保護基團Fmoc脫除反應，得到連接側鏈Pbf保護精氨酸、纈氨酸、側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂；

(8)在揮發性有機溶劑和非揮發性有機溶劑組成的溶劑中，在縮合劑的存在下，在助縮合劑的啟動下，步驟(7)所得的連接側鏈Pbf保護精氨酸、纈氨酸、側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂和氨基Boc保護的天冬酰胺進行縮合反應，得到連接氨基Boc保護的天冬酰胺、側鏈Pbf保護精氨酸、纈氨酸、側鏈tBu保護酪氨酸、纈氨酸、側鏈Trt保護組氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸的樹脂，即保護增血壓素R₁-Asn-Arg(R₂)-Val-Tyr(R₃)-Val-His(R₄)-Pro-Phe-R₅，其中，R₁為氨基保護基Boc，R₂、R₃、R₄為側鏈保護基Pbf、tBu、Trt，R₅為羧基樹脂。