[發明專利]一種犬細小病毒蜂膠滅活疫苗及其制備方法

無效

• 申請號: 201210130887.7
• 申請日: 2012-05-01
• 公開（公告）號: CN102657860A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 單虎;楊瑞梅;韓先杰;黃娟;秦曉冰;張傳美
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: A61K39/23
• 分類號: A61K39/23;A61K39/39;A61P31/20;C12N7/00;C12N7/02
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技術領域

本發明涉及一種犬細小病毒蜂膠滅活疫苗及其制備方法，屬于獸醫生物制品技術領域。

背景技術

犬細小病毒（Canine?Parvovirus，CPV）感染是多發生于犬科動物的一種烈性傳染病。臨床表現以急性出血性腸炎和非化膿性心肌炎為特征。CPV屬細小病毒科，細小病毒屬。CPV對多種理化因素和常用消毒劑具有較強的抵抗力。犬感染CPV發病急，死亡率高，常呈暴發性流行；不同年齡、性別、品種的犬均可感染；本病發生沒有明顯的季節性。

近年來，隨著我國工作犬（軍犬、警犬、導盲犬等）、實驗用犬和寵物犬飼養量的大幅增加，犬細小病毒感染日趨嚴重，給養業犬帶來了重大的經濟損失，成為危害養犬業重大疫病之一。本病發病迅速，疫苗免疫接種是預防本病的有效措施。

本發明的目的是制備出一種安全、有效的犬細小病毒蜂膠滅活疫苗，并以蜂膠作為佐劑制備一種犬細小病毒蜂膠滅活疫苗。

發明內容

本發明的目的是利用犬細小病毒株作為生產疫苗的毒株，通過在F81細胞在進行病毒繁殖，經過收獲、滅活，并以蜂膠作為佐劑制備一種犬細小病毒蜂膠滅活疫苗，以制備一種既能減小犬注射疫苗后的不良反應又能增強犬對該滅活病毒的應答反應。

為達到上述目的，本發明所采用的具體技術方案如下：

一種犬細小病毒蜂膠滅活疫苗，犬細小滅活病毒以蜂膠為佐劑而制成的犬細小病毒蜂膠滅活疫苗。

上述犬細小病毒蜂膠滅活疫苗的制備方法，具體步驟如下：

（1）犬細小病毒的培養及滅活：將細小病毒生產用疫苗株接種F81細胞36℃培養，當接毒細胞有80%出現病變時，收獲病毒細胞培養液，經過0.2%甲醛滅活，180轉/分鐘的搖床內搖48小時，以制備病毒滅活液；

（2）蜂膠液制備；

（3）按每ml疫苗含蜂膠干物質含量為8～15mg標準添加蜂膠溶液攪拌15～20分鐘，使其充分混合乳化。

進一步地，所述的蜂膠液制備由以下步驟完成：選取已知純度的蜂膠，經破碎后過篩，溶于95%的乙醇溶液，再根據要求配成適當濃度的溶液于4℃下保存備用。

（4）本發明是以本發明人于中國獸醫藥品監察所菌種室購買的一株犬細小病毒CPV1作為生產疫苗的毒株，犬細小病毒CPV1，2003.3.3，凍干（0.5ml），有效期15年。

本發明的犬細小病毒蜂膠滅活疫苗的用途，主要用于控制犬細小病毒病。

具體實施方式

1.細小病毒滅活原液的制備。

（1)將生長良好的F81細胞按常規方法傳代，待細胞長成80%單層后，傾去生長液，換以含1%毒種的維持液(含2%新生牛血清的MEM)，置36℃繼續培養，轉瓶轉速為8～lOr／h。

（2)接種后，每日觀察細胞病變，當細胞病變(CPE)達80%左右時即可收獲，凍融1次，置-15℃以下凍結保存，待檢備用。

（3)按病毒液總量的0.2%加入甲醛溶液，充分混勻，置36℃下滅活，待溫度升至36℃開始計時，180轉/分鐘的搖床中不間斷搖動，滅活48小時。

2.佐劑原液的制備

選取購自山東臨清市清坤蜂蠟巢礎加工廠已知純度的蜂膠，經破碎后過篩，溶于95%的乙醇溶液，再根據要求配成適當濃度的溶液于4℃下保存備用。

3.成品的制備

按每ml疫苗含蜂膠干物質含量為8～15mg標準添加蜂膠溶液攪拌15～20分鐘，使其充分混合乳化。

4.犬細小病毒蜂膠滅活疫苗的檢驗方法

(1)性狀??本品靜置后，上層為粉紅色液體，下層為淡粉紅色沉淀，振搖后呈均勻混懸液。

(2)無菌檢驗按《中國獸藥典》規定的方法進行檢驗，應無菌生長。

(3)安全檢驗用2～10月齡健康易感犬5只，各皮下注射疫苗3ml，連續觀察10日，應全部健活。

(4)效力檢驗用2～10月齡健康易感犬5只，各皮下注射疫苗Iml，同時設不接種對照犬5只。免疫后14日采血，分離血清，分別測定抗MEV?HI抗體，免疫犬抗MEVHI抗體均應≥1：32，對照犬抗MEV?HI抗體均應≤1：4。

5.甲醛和汞類防腐劑殘留量測定??按《中國獸藥典》附錄進行測定，應符合獸用生物制品通則的規定。

6.犬細小病毒蜂膠滅活疫苗安全性試驗