[發(fā)明專利]肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片及肌酸酐測定法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210130423.6
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102757893A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 中村勤
• 申請（專利權(quán)）人: 愛科來株式會社
• 主分類號: C12M1/34
• 分類號: C12M1/34;C12Q1/34;C12Q1/28;C12Q1/26
• 代理公司: 中原信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11219
• 代理人: 金龍河;樊衛(wèi)民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片及肌酸酐測定法。

背景技術(shù)

肌酸酐是肌酸通路的最終代謝物，肌酸具有脫水而成環(huán)的結(jié)構(gòu)。在體內(nèi)，大部分以肌酸或磷酸肌酸的形式存在于肌肉中。肌酸從ATP接受高能磷酸而形成磷酸肌酸，從而作為儲能物質(zhì)發(fā)揮作用。具體而言，磷酸肌酸在肌肉收縮等能量消耗時(shí)向ADP轉(zhuǎn)移高能磷酸而變回肌酸，或者通過非酶反應(yīng)而形成肌酸酐。然后，生成的肌酸酐通過腎臟排泄到尿中。

因此，肌酸酐的尿中排泄量即尿中濃度被用作肌肉疾病和腎功能障礙的指標(biāo)。此外，在患腎功能障礙等情況下，血中的肌酸酐濃度可以作為疾病的指標(biāo)。

在集體診察的現(xiàn)場或篩選檢查等初期診斷的情況下，為了迅速地進(jìn)行肌酸酐的尿中、血清中或血漿中的濃度的測定，廣泛使用將與肌酸酐發(fā)生反應(yīng)而顯色的試劑預(yù)先涂布或浸滲到支持體上并使其干燥而成的干式試驗(yàn)片。

現(xiàn)有的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片利用在強(qiáng)堿性條件下由肌酸酐與苦味酸的縮合物引起的顯色反應(yīng)(捷非氏反應(yīng))。作為這樣的試驗(yàn)片之一，日本特開平09-061430號公報(bào)中公開了一種肌酸酐測定用試驗(yàn)片，其由支持體、負(fù)載在該支持體上的含有3，5-二硝基苯甲酸的試劑層和設(shè)置在該試劑層上的含有氫氧化鋰等強(qiáng)堿性物質(zhì)的展開層構(gòu)成。

此外，作為用于測定肌酸酐的顯色反應(yīng)，還已知有酶法。日本專利第4243255號公開了對由肌酸酐與肌酐亞胺水解酶的反應(yīng)生成的氣態(tài)氨進(jìn)行定量的干式分析元件。具體而言，在透明支持體上依次一體地層疊有：含有由于氣態(tài)氨而產(chǎn)生可檢測的變化的指示藥的指示藥層、使氣態(tài)氨通過的液體阻斷層、含有堿性緩沖劑且可以根據(jù)需要與基質(zhì)發(fā)生反應(yīng)而生成氨的試劑層、以及展開層。

此外，就現(xiàn)有的濕式肌酸酐測定試劑盒而言，利用作為酶法的一種的肌酸酶-肌氨酸氧化酶-過氧化物酶法?！癈RE-L試薬カイノス添付文書，第4版，カイノス株式會社，2010”、“N-アツセイCRE-Lニツト一ボ一添付文書，第11版，日東紡織株式會社，2008”及“エクセライザCRE添付文書，第6版，積水醫(yī)療株式會社，2008”中公開了一種由第一反應(yīng)試劑和第二反應(yīng)試劑構(gòu)成的濕式肌酸酐測定試劑盒。第一反應(yīng)試劑利用肌酸酐酶預(yù)先將樣品中的內(nèi)源性肌酸分解。第二反應(yīng)試劑添加到添加了第一反應(yīng)試劑而反應(yīng)后的樣品中，利用肌酸酶使樣品中的肌酸酐轉(zhuǎn)變?yōu)榧∷幔⒗眉∷狒甘乖摷∷岱纸鉃榧“彼岷湍蛩?，使該肌氨酸與肌氨酸氧化酶反應(yīng)而生成過氧化氫，在該過氧化氫及過氧化物酶存在下使供氫體化合物及4-氨基安替比林發(fā)生氧化縮合，由此生成醌色素。

但是，日本特開平09-061430號公報(bào)所示的現(xiàn)有的利用捷非氏反應(yīng)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片，在低濃度范圍內(nèi)測定肌酸酐時(shí)存在誤差大的缺點(diǎn)。

日本專利第4243255號所公開的干式分析元件在低濃度范圍內(nèi)測定肌酸時(shí)的誤差比利用捷非氏反應(yīng)時(shí)小，但存在如下缺點(diǎn)：不能完全消除樣品中的內(nèi)源性氨的影響，此外，需要復(fù)雜的層結(jié)構(gòu)來控制作為反應(yīng)產(chǎn)物的氨氣，從而使制造的成品率低。

此外，現(xiàn)有的干式試驗(yàn)片中，由于該試驗(yàn)片中所含的所有試劑都進(jìn)入樣品中來發(fā)生反應(yīng)，因此，如果不借助日本專利第4243255號中記載的氨氣等氣體，則不能將由兩階段以上構(gòu)成的反應(yīng)體系應(yīng)用于干式試驗(yàn)。因此，作為在反應(yīng)過程中不產(chǎn)生氣體的兩階段反應(yīng)體系的“CRE-L試薬カイノス添付文書，第4版，カイノス株式會社，2010”、“N-アツセイCRE-Lニツト一ボ一添付文書，第11版，日東紡織株式會社，2008”及“エクセライザCRE添付文書，第6版，積水醫(yī)療株式會社，2008”中記載的肌酸酶-肌氨酸氧化酶-過氧化物酶法，到目前為止還不能用于干式試驗(yàn)片。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明鑒于上述問題而完成，其目的在于，提供在低濃度范圍內(nèi)測定肌酸酐時(shí)的誤差小且具有簡單的結(jié)構(gòu)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片以及使用該試驗(yàn)片的肌酸酐測定法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的第一觀點(diǎn)的肌酸酐測定用干式試驗(yàn)片的特征在于，

具備：支持體、設(shè)置在該支持體上的試劑層、設(shè)置在該試劑層上的試劑保持層以及設(shè)置在上述試劑層與上述試劑保持層之間來連接上述試劑層與上述試劑保持層的連接層，

上述試劑層含有肌酸酐酶，

上述試劑保持層含有肌酸酶和肌氨酸氧化酶，

過氧化物酶、4-氨基安替比林以及供氫體化合物各自包含在上述試劑層和上述試劑保持層中的僅任意一者的層中或者包含在兩者的層中，且

上述連接層使滴加在上述試劑保持層上的液態(tài)樣品延遲到達(dá)上述試劑層。