[發明專利]腸道病毒71型阜陽株及其減毒株的cDNA感染性克隆及應用

有效

• 申請號: 201210130398.1
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN103374580A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 岑山;張永欣;李曉宇;周永東
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫藥生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/41
• 分類號: C12N15/41;C07K14/085;C12N1/21;C12N7/01;A61K39/125;A61P31/14;C12R1/93;C12R1/19
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.腸道病毒71型阜陽株的cDNA感染性克隆，其是通過反向遺傳操作獲得的腸道病毒71型阜陽株的cDNA感染性克隆。

2.根據權利要求1所述的cDNA感染性克隆，其編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?No.1所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

3.根據權利要求2所述的cDNA感染性克隆，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.3所示。

4.含有權利要求1-3任一項所述腸道病毒71型阜陽株的cDNA感染性克隆的宿主細胞，其為大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)FY/pBR322/DH5α，保藏號CGMCC?No.5820。

5.腸道病毒71型阜陽株的減毒株的cDNA感染性克隆，其是通過反向遺傳操作獲得的腸道病毒71型阜陽株的減毒株的cDNA感染性克隆。

6.根據權利要求5所述的cDNA感染性克隆，其編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示，或該序列經替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

7.根據權利要求6所述的cDNA感染性克隆，其核苷酸序列如SEQ?ID?No.4所示。

8.含有權利要求5-7任一項所述腸道病毒71型阜陽株的減毒株的cDNA感染性克隆的宿主細胞，其為大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)ZD/pBR322/DH5α，保藏號CGMCC?No.5819。

9.制備腸道病毒71型阜陽株及其減毒株的拯救病毒的方法，其特征在于，首先對腸道病毒71型阜陽株及其減毒株進行全基因組測序，根據測序結果設計用于構建cDNA克隆的引物和酶切位點，通過引物在基因組cDNA的5’端引入T7啟動子，在其3’端引入polyA尾，然后分別以腸道病毒71型阜陽株及其減毒株的基因組為模板，進行RT-PCR反應，得到全長cDNA克隆，酶切線性化后進行體外轉錄，用體外轉錄出的RNA轉染vero細胞，獲得各自的拯救病毒。

10.權利要求1-3任一項所述腸道病毒71型阜陽株的cDNA感染性克隆及權利要求5-7任一項所述腸道病毒71型阜陽株的減毒株的cDNA感染性克隆在制備抗EV71病毒藥物及疫苗中的應用。