[發(fā)明專利]一種新的單克隆抗體的制備方法及用途

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210130232.X
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN103374068A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫兵;伊春艷;邊超;凌志洋
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號: C07K16/00
• 分類號: C07K16/00;C07K16/06;C12N15/85;C12N15/63;G01N33/543;A61K48/00
• 代理公司: 上海專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 31100
• 代理人: 陳靜

1.一種篩選單克隆抗體的方法，包括：

(1)提供構(gòu)建物1，該構(gòu)建物1包括：表達(dá)盒1，其包括啟動(dòng)子1、生物素連接酶BirA編碼基因、終止子1；和表達(dá)盒2，其包括啟動(dòng)子2、AviTag編碼基因、抗原編碼基因、終止子2；

將構(gòu)建物1轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，表達(dá)獲得生物素化的抗原，裂解細(xì)胞獲得含有生物素化抗原的裂解液；

(2)提供構(gòu)建物2，該構(gòu)建物2包括：表達(dá)盒3，其包括啟動(dòng)子3、信號肽編碼基因、GM-CSF編碼基因、終止子；和表達(dá)盒4，其包括啟動(dòng)子4、信號肽編碼基因、抗原編碼基因；

將構(gòu)建物2免疫哺乳動(dòng)物，取哺乳動(dòng)物脾臟細(xì)胞制備雜交瘤細(xì)胞；

(3)將步驟(1)獲得的含有生物素化抗原的裂解液與包被有親和素的固相載體接觸，從而生物素化的抗原被固定于固相載體；以該生物素化的抗原來篩選步驟(2)獲得的雜交瘤細(xì)胞分泌的抗體，獲得特異性抗所述抗原的單克隆抗體。

2.一種制備生物素化抗原的方法，包括：

提供構(gòu)建物1，該構(gòu)建物1包括：表達(dá)盒1，其包括啟動(dòng)子1、生物素連接酶BirA編碼基因、終止子1；和表達(dá)盒2，其包括啟動(dòng)子2、AviTag編碼基因、抗原編碼基因、終止子2；

將構(gòu)建物1轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，表達(dá)獲得生物素化的抗原。

3.一種制備抗體的方法，包括：提供構(gòu)建物2，該構(gòu)建物2包括：表達(dá)盒3，其包括啟動(dòng)子3、信號肽編碼基因、GM-CSF編碼基因、終止子；和表達(dá)盒4，其包括啟動(dòng)子4、信號肽編碼基因、抗原編碼基因；

將構(gòu)建物2免疫哺乳動(dòng)物，獲得哺乳動(dòng)物的免疫血清，其中包括抗所述抗原的多克隆抗體；或?qū)?gòu)建物2免疫哺乳動(dòng)物，獲取哺乳動(dòng)物的脾臟細(xì)胞，制備單克隆抗體。

4.一種評估抗體的效價(jià)的方法，包括：

提供構(gòu)建物1，該構(gòu)建物1包括：表達(dá)盒1，其包括啟動(dòng)子1、生物素連接酶BirA編碼基因、終止子1；和表達(dá)盒2，其包括啟動(dòng)子2、AviTag編碼基因、抗原編碼基因、終止子2；

將構(gòu)建物1轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，表達(dá)獲得生物素化的抗原，裂解細(xì)胞獲得含有生物素化抗原的裂解液；

將獲得的含有生物素化抗原的裂解液與包被有親和素的固相載體接觸，從而生物素化的抗原被固定于固相載體；以該生物素化的抗原來評估特異性抗該抗原的抗體的效價(jià)。

5.如權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，表達(dá)盒1中，在啟動(dòng)子1與生物素連接酶BirA編碼基因之間，還包括KOZAK基因；或

表達(dá)盒2中，在啟動(dòng)子2與AviTag編碼基因之間，還包括KOZAK基因和/或純化標(biāo)簽編碼基因；或

表達(dá)盒3中，在啟動(dòng)子3與信號肽編碼基因之間，還包括KOZAK基因；或

表達(dá)盒4中，在啟動(dòng)子4與信號肽編碼基因之間，還包括KOZAK基因。

6.如權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的生物素連接酶BirA編碼基因具有SEQ?ID?NO：7所示的核苷酸序列；或。

所述的AviTag具有SEQ?ID?NO：9所示的核苷酸序列；或

所述的GM-CSF編碼基因具有SEQ?ID?NO：4所示的核苷酸序列；或

所述的信號肽是人IgE重鏈信號肽；更佳地，所述的IgE重鏈信號肽具有SEQ?ID?NO：3中第16-69位所示的核苷酸序列；或

所述的KOZAK基因具有SEQ?ID?NO：中第7-15位所示的核苷酸序列；或

所述的純化標(biāo)簽是Flag標(biāo)簽；更佳地，所述的Flag標(biāo)簽編碼基因具有SEQID?NO：10所示的核苷酸序列。

7.如權(quán)利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述的抗原是刺激哺乳動(dòng)物免疫系統(tǒng)使之產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，并能與相應(yīng)免疫應(yīng)答產(chǎn)物在體內(nèi)外發(fā)生特異性結(jié)合的物質(zhì)；較佳地，所述的抗原選自：病毒蛋白，細(xì)菌蛋白；更特別地，所述的病毒蛋白包括：漢灘病毒來源的蛋白，波馬拉病毒來源的蛋白，流感病毒來源的蛋白，禽流感病毒來源的蛋白，皰疹病毒來源的蛋白，豬瘟病毒來源的蛋白，黃病毒來源的蛋白，乙肝病毒來源的蛋白，呼吸道合胞病毒來源的蛋白；所述的細(xì)菌蛋白包括：幽門螺桿菌來源的蛋白，念珠菌來源的蛋白，鼠疫菌來源的蛋白，霍亂菌來源的蛋白。

8.一種DNA疫苗，包括：表達(dá)盒3，其包括啟動(dòng)子3、信號肽編碼基因、GM-CSF編碼基因、終止子；和表達(dá)盒4，其包括啟動(dòng)子4、信號肽編碼基因、抗原編碼基因。