[發明專利]一種白色念珠菌的PCR檢測方法

無效

• 申請號: 201210130061.0
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102634594A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 劉生峰;肖進文;李應國;歐陽珂珮;周慶;王國民;李賢良;聶福平;王昱
• 申請（專利權）人: 重慶出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心;劉生峰
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 重慶市恒信知識產權代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

1.一種白色念珠菌的PCR檢測用引物，其特征是：該引物的核苷酸序列為上游引物SEQ?ID?NO1和下游引物SEQ?ID?NO2。

2.一種利用權利要求1所述引物的白色念珠菌的PCR檢測方法，包括以下步驟：

1）待檢樣品增菌培養；

2）提取待檢樣品的核酸；

3）PCR擴增反應

擴增體系：每25μL擴增體系中包含10×PCR緩沖液2.5μL，10?mmol/L?dNTP?混合液2.5μL?，25?mmol/L?MgCl_2?2.5μL，5U/μL?Taq聚合酶0.2μL，?25μmol/L?SEQ?ID?NO1和SEQ?ID?NO2各0.5μL，步驟2）所獲核酸溶液1μL，超純水補體積至25μL；

擴增參數：95℃預變性5min，95℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸lmin，擴增35個循環，最后一個循環于72℃延伸5min；

4）將步驟3）中的擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳；

5）結果分析：若有擴增產物目的條帶出現則待測樣品中有白色念珠菌，否則沒有。

3.根據權利要求2所述白色念珠菌的PCR檢測方法，其特征是：步驟1）中所述增菌培養是將待檢樣品接種于沙氏葡萄糖肉湯培養基，30℃培養48～72小時。

4.根據權利要求2所述白色念珠菌的PCR檢測方法，其特征是：步驟5）中所述擴增產物目的條帶為235bp。