[發明專利]一種人用流感病毒裂解疫苗的病毒裂解滅活方法

有效

• 申請號: 201210129270.3
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102614508A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 張雪梅;王亞軍;趙大鵬;李曉波;張賜強;徐文;顧建陽;范宇紅;匡科偉;畢業;任琦;劉蔭;郭占龍;趙志芳;郭雪;劉旭光;孫麗娟;王春鵬;張玉輝;宋澤民;韓俊海;谷麗娟;吳業宏
• 申請（專利權）人: 長春生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: A61K39/145
• 分類號: A61K39/145;A61P31/16;C12N7/06
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

1.一種人用流感病毒裂解疫苗的病毒裂解滅活方法，其特征在于包括下列步驟：

（一）、將梯密度離心純化后的H1N1型、H3N2型或B型單價流感全病毒置于密閉容器中、其蛋白含量控制在2.0-3.0?mg/ml，加入作用濃度為0.7%-0.9%濃度的裂解劑Triton?X-100或作用濃度范圍為0.7-1.2%的Triton?N-101；置20℃-25℃，振蕩裂解；

（二）、采用震蕩裝置進行震蕩，震蕩時間為采用Triton?X-100?震蕩1.5-2.5h,或采用Triton?N-101震蕩4-5h，超濾去除裂解劑；

（三）、病毒滅活：滅活采用pH值7.2、用磷酸鹽緩沖液PBS終濃度為0.1?M/L、EDTA終濃度為0.5mM/L的調配流感病毒滅活溶液,裂解后病毒液的蛋白濃度0.5-1.0mg/ml，加入終濃度為200ug/ml的甲醛，2-8℃震蕩滅活，滅活時長：4-5天。

2.根據權利要求1所述的一種人用流感病毒裂解疫苗的病毒裂解滅活方法，其特征在于所述的流感病毒滅活溶液是通過下列方法得到的：

（1）2M/L?磷酸鹽緩沖液PBS的配制：

稱取1600g?NaCl、40g?KCl、288g?Na₂HPO₄和48g?KH₂PO₄,溶于800ml蒸餾水中，用HCl調節溶液的pH值至7.2，最后加蒸餾水定容至1L；

在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌40分鐘，保存于室溫或4℃冰箱中；

（2）100mM/L?EDTA溶液的配制：

稱取37.224gEDTA溶于800ml蒸餾水中，用HCl調節溶液的pH值至7.2，最后加蒸餾水定容至1L；

在15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌40分鐘，保存于室溫或4℃冰箱中；

?（3）流感病毒滅活溶液的調配：

分別將2M/L?磷酸鹽緩沖液PBS20倍稀釋，100mM/L?EDTA溶液200倍稀釋后混合，最終配成pH值7.2，PBS終濃度為0.1?M/L、EDTA終濃度為0.5mM/L的流感病毒滅活溶液。

3.根據權利要求1所述的一種人用流感病毒裂解疫苗的病毒裂解滅活方法，其特征在于還包括：裂解后純化步驟：

采用柱色譜法進行病毒裂解后的再純化，?色譜介質為Sepherose?4FF，每次上樣量不超過柱體積的5%，以磷酸鹽緩沖液PBS0.01?mol/L，pH7.2為洗脫液，流速為?300ml/分鐘，在監測波長為280nm的條件下，收集全部第一蛋白峰。