[發(fā)明專利]一種重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210129184.2
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102643887A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設計）人: 時成波;曹玉鋒;徐軍
• 申請（專利權）人: 長春生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C12R1/19
• 代理公司: 深圳市君勝知識產(chǎn)權代理事務所 44268
• 代理人: 王永文

1.一種重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，包括以下步驟：

A，培養(yǎng)工程菌株，并制備基礎培養(yǎng)基和補料培養(yǎng)基；

B，所述基礎培養(yǎng)基經(jīng)過滅菌處理后，接入所述工程菌株；

C，監(jiān)測所述工程菌株的細菌細胞密度OD600，當所述OD600的值為40～80時，在基礎培養(yǎng)基中加入誘導劑進行誘導；

D，當所述OD600的值至少提高百分之五時，進行收菌；

E，離心提純后，即得P179蛋白；

在所述步驟B~D過程中，實時監(jiān)測基礎培養(yǎng)基中葡萄糖的含量，當葡萄糖的含量少于預定值時，增加補料培養(yǎng)基，使得葡萄糖的含量等于或大于所述預定值。

2.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟A中的所述工程菌株為大腸桿菌HEV179/BL21(DE3)。

3.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟A中的所述基礎培養(yǎng)基的配方為：葡萄糖30~50g，酵母粉90~100g，蛋白胨200~250g，NaCl?80~100g，MgSO₄?8~15g，消泡劑2~5ml，KH₂PO₄?35~45g，Na₂HPO₄·12H₂O?120~150g，加蒸餾水定容至20L。

4.如權利要求3所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟A中的所述基礎培養(yǎng)基的配方還包括微量元素?30~50ml，所述微量元素的配方為：FeSO₄·7H₂O?0.1~0.2g，CaC1₂·2H₂O?0.025~0.05g，ZnSO₄·7H₂O?0.0225~0.05g，MnSO₄·H₂O?0.001~0.005g，Na₂MoO₄·2H₂O?0.001~0.005g，Na₂B₄O₇·12H₂O?0.0002~0.0005g，CuS0₄·5H₂O?0.01~0.04g，CoCl₂·6H₂O?0.001~0.005g，加蒸餾水定容至1L。

5.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，在所述步驟B~D過程中，保持溫度在35～38℃之間，溶解氧的濃度不低于30%，所述基礎培養(yǎng)基的pH值為?6.0~8.0。

6.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，所述預定值為0.1%。

7.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟A中，所述補料培養(yǎng)基的配方為A配方或B配方；

所述A配方為：葡萄糖230~250g，MgSO_4?3~5g，加蒸餾水定容至1L；

所述B配方為：葡萄糖230~250g，酵母粉40~50g，MgSO₄?3~5g，加蒸餾水定容至1L。

8.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，所述誘導劑為IPTG，IPTG的濃度為0.2~1.0mmol/L，誘導時間為4~7小時。

9.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟C中，當采用空氣為氣源時，在所述OD600的值為40～50時，加入誘導劑IPTG進行誘導；

所述OD600的值為55～65時，進行收菌。

10.如權利要求1所述的重組戊型肝炎疫苗抗原P179蛋白的發(fā)酵制備方法，其特征在于，步驟C中采用純氧為氣源時，所述OD600的值為60～75時，加入誘導劑IPTG進行誘導；

所述OD600的值為80～100時，進行收菌。