[發明專利]豬圓環病毒II型衣殼蛋白基因、表達載體的構建及其蛋白高效表達的方法

有效

• 申請號: 201210128807.4
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102634525A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 蔡雪輝;涂亞斌;武嘉男
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院哈爾濱獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C12N15/63;C12N15/81;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C07K14/01
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨;費碧華

技術領域

本發明涉及一種豬圓環病毒II型衣殼蛋白基因的改造、表達載體的構建、在畢赤酵母中的高效表達及其蛋白的制備方法。屬于動物基因工程與動物病毒學技術領域。?

背景技術

德國學者Tischer等于1974年從PK-15細胞的污染病毒中檢出一種形態學上與細小核糖核酸病毒相似的小球形病毒和乳多泡病毒樣病毒粒子(Tischer等.Characterization?of?papovavirus?and?picornavirus-like?particles?in?permanent?pig?kidney?cell?lines.Zbl?Bakt?Hyg?I?Abt?Orig?A.1974，226：153-167)，并于1982年將其命名為豬圓環病毒(Porcine?circovirus，PCV)(Tischer等.A?very?small?porcine?virus?with?circular?single?stranded?DNA.Nature，1982，295：64-66.)。1991年在加拿大的豬群中發現一種稱為斷乳仔豬多系統衰竭綜合征(postweaning?multisystemicwasting?syndrome，PMWS)的疾病，豬2型圓環病毒(porcine?circo?virus?2，PCV2)是該病的主要病原(Harding等.Recognizing?and?diagnosing?postweaning?multisystemic?wasting?syndrome(PMWS).Swine?Health?Prod.1997，5：201-203)。在我國，郎洪武等采集了7省(市)22個豬群的559份血清，用ELISA方法檢測20日齡未斷奶仔豬、1～2月齡斷奶仔豬、后備母豬及經產母豬，結果總陽性率為42.9％(郎洪武等.斷奶豬多系統衰弱綜合征血清抗體檢測.中國獸醫科技，2000，30：3-5)。由PCV2感染引起的PMWS于2001年開始在我國各地呈暴發流行，是危害我國養豬業的重要疫病之一(郎洪武等.豬圓環病毒分離鑒定及豬斷奶多系統衰竭綜合征的診斷.中國獸醫科技，2001，31(3)：3-5；王忠田等.規模化豬場豬圓環病毒2型感染的流行病學調查.中國獸醫雜志，2002，38(10)：3-6.)。?

PCV2含有2個主要的開放閱讀框(ORF)，其中ORF2基因編碼病毒的衣殼蛋白(Cap)是主要結構蛋白，也是主要免疫原性蛋白，是發展新型疫苗的良好靶基因(Nawagitgul等.Open?reading?frame?2?of?porcine?circovirus?type?2encodes?a?major??capsid?protein.J?Gen?Virol，2000，81(9)：2281-2287)。?

PCV2在細胞上增值滴度很低，不引起細胞病變，使用D-氨基葡萄糖處理后病毒滴度可以升高，但D-氨基葡萄糖對細胞有毒性會使細胞很快死亡(Tischer等.Replication?of?Porcine?Circovirus：Induction?by?Glucosamine?and?Cell?Cycle?Dependence.Arch?Virol，1987，96：39-57)。國內雖已經有PCV2滅活疫苗上市，但由于依然受到病毒含量等因素的限制而導致生產成本過高，其結果是國產圓環病毒滅活疫苗是最貴的豬病疫苗之一，國產圓環病毒滅活疫苗昂貴的價格會限制其應用范圍。?