[發明專利]轉基因大豆A5547-127及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 201210128792.1
• 申請日: 2012-04-28
• 公開（公告）號: CN102634590A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 高東微;易敏英;劉靜宇;唐大運;肖艷文;石磊
• 申請（專利權）人: 廣州迪澳生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 譚英強

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，涉及轉基因植物品種的檢測方法，具體涉及轉基因大豆A5547-127及其衍生品種的LAMP檢測引物組、檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

國際農業生物技術應用服務組織近期發表的《2010年全球生物技術/轉基因作物商業化發展態勢》報告顯示，由于轉基因作物帶來的巨大益處，過去15年內大約有1億人次的農民做出種植決定。自轉基因作物投入商業化種植15年來，全球轉基因作物種植面積累計已經超過10億公頃。2010年，全球29個國家的1540萬農民種植了共1.48億公頃的轉基因作物。自1996年至2010年，全球轉基因作物的種植面積增加了87倍。種植轉基因作物排名前十位的國家種植面積首次均超過了100萬公頃。這些國家按照作物種植面積的大小排列分別是：美國（6680萬公頃）、巴西（2540萬公頃）、阿根廷（2290萬公頃）、印度（940萬公頃）、加拿大（880萬公頃）、中國（350萬公頃）、巴拉圭（260萬公頃）、巴基斯坦（240萬公頃）、南非（220萬公頃）和烏拉圭（110萬公頃）。目前，世界各國已進行田間試驗的轉基因作物超過5000種，批準商品化的轉基因作物有160多種，包括玉米、大豆、油菜、番茄、馬鈴薯、甜椒、木瓜、甜菜、煙草、水稻等。

大豆（Glycine?max）是一種其種子含有豐富的蛋白質的豆科植物，原產國為中國，至今已有5000年的種植史。1996年以來中國開始大量進口大豆，進口量相當于我國的大豆產量。中國進口的大豆主要來自美國、阿根廷和巴西。這三個國家均為轉基因大豆種植大國。其中，從美國進口的轉基因大豆就占進口總量的89%。從世界范圍看，轉基因大豆的推廣已經帶來了巨大的社會和經濟效益。然而轉基因大豆在帶來巨大社會和經濟效益的同時也存在許多問題，主要集中在轉基因食品的安全性以及對生態環境的安全性方面，包括對人和動物健康的風險，對生態環境與農業的風險，對非目標生物的風險。針對第一種風險，1993年，聯合國經濟發展與合作組織（OECO）提出了食品安全性評估的“實質等同性”原則。如果準基因作物生產的產品與傳統產品具有實質等同性，則可以認為是安全的。最早提出對轉基因食品進行標識管理的是歐盟，1998年，歐盟在世界上簽署第一個法案，要求對轉基因產品進行標簽說明；1999年，要求出口到歐盟的非轉基因產品不得含有1%的轉基因產品污染；2002年，歐盟將標識的最低限量降低到0.9%。日本，澳大利亞，新西蘭對轉基因成分的最低含量做了不同規定，域值從1～5%不等。

我國于2001年5月9日公布并實施《農業轉基因生物安全管理條例》，于2002年1月5日公布了農業轉基因生物安全評價，標識和進口安全管理三個配套管理辦法，確定了第一批實施標識管理的農業轉基因生物目錄，并于2002年3月20日起正式實施。

為了能夠對轉基因作物及其產品做出綜合評價，除了需要各國政府和國際機構制定科學的安全評價體系以及嚴格的管理法規外，建立有效的方法體系對轉基因作物進行檢測也很重要，這是對轉基因作物進行安全性評價和實施監管的基礎，也是農產品國際貿易健康發展的重要保障。

轉基因產品的檢測要求方法要快速，準確，靈敏，并且還得考慮適應大樣品量，目標基因種類多等特點。因此，目前轉基因作物的檢測主要是檢測樣品是否含有外源蛋白質（基因表達產物）和是否含有外源基因（DNA）。轉基因作物中外源蛋白可以利用基于免疫原理的酶聯免疫吸附法（ELISA）試紙條檢測、Western雜交等方法檢測，主要從待測樣品中按照一定的程序抽提含有目的蛋白的基質，利用與目的蛋白（抗原）特異性結合的特性，通過偶聯抗體與抗原抗體復合物的作用產生可檢測的信號，但是這種方法要求高質量高穩定性的抗體，否則因準確性不夠，只能作為輔助檢測手段。轉基因作物的核酸檢測方法主要有兩種：核酸分子雜交技術(Sourthernblot)，PCR檢測技術。其中PCR檢測方法是最主要，最準確地檢測轉基因作物的方法，包括定性PCR方法，符合PCR方法，巢式PCR方法，競爭性定量PCR方法，熒光定量PCR方法等等。