[發明專利]一種運用于法醫鑒定痕量DNA的預擴增方法

無效

• 申請號: 201210127726.2
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102634510A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 羅瑛;朱暉;唐文如;柳海濤;李安;史斌;蔡海強
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種高效的運用于法醫鑒定痕量DNA的預擴增方法，屬于法醫物證生物學、人類學、刑偵學等領域。

背景技術

在現行的法醫鑒定方面，DNA擴增技術趨于成熟，但當模板量低于100pg時就很難通過常規的方法進行檢測，同時指紋在犯罪偵查中十分重要，但犯罪現場的一些特征點不全的殘缺指紋往往會給法醫鑒定造成阻礙，通常指紋中會存在極少的脫落細胞，由于細胞數目較少，DNA總量不高很難成為DNA檢材。

在實際案例中，在犯罪現場往往會有嫌疑人或事件責任人遺留的指紋，常規的指紋檢測是通過形態學線條特征點來認定個體，但一些殘缺的指紋特征點較少往往不能作為個人認定的手段，指紋中的DNA總量又比較低，很難直接運用于DNA檢測。隨著DNA擴增技術的發展，一些痕量DNA成為指證犯罪嫌疑人的另一有效途徑。

隨著對短串聯重復序列(short?tandem?repeat，STR)的研究逐漸深入，特別是STR-DNA?分型技術的科學性和實用性得到廣大司法部門和社會各界的一致認可和高度重視，從而在各類案件和事件的調查中發揮其作用。然而，由于犯罪現場的DNA殘留量甚微，痕量法醫物證DNA采集、回收率低進一步導致了后續的DNA檢出率低，STR分型失敗，不能指認犯罪個體的主要原因。

目前，已有大量研究和文獻報道痕量DNA擴增技術（Cheung?VG.Nelson?et?al.2005、Hanson?EK.Ballantyne?J?et?al.2005、Marchion?A.?et?al.2001、Sun?G.，2005、陳玲et?al.2007、Li??Y.?et?al.2008）。其主要的技術包括：

1、??????基于熱循環以PCR為基礎的WGA技術，如簡并寡核苷酸引物、連接反應介導的PCR、擴增前引物延伸反應等。

2、??????基于等溫反應不以PCR為基礎的WGA技術，如多重置換擴增和基于引物酶的全基因組擴增技術。

3、??????在STR-DNA擴增條件方面，主要采用Profiler?Plus（美國ABI公司）試劑盒的10ul擴增體系。

目前的技術在實際應用中，對于DNA含量高的樣本檢出率較高，分型較容易，如從現場遺留的血痕，體液痕跡（鄭會芬，董研?et?al.2006），甚至吃剩的食物上可以檢測到罪犯的DNA（張曉紅，唐建新?et?al.2006），然而對于DNA含量低于100pg的樣本容易出現等位基因的失衡甚至丟失分型困難（Sun?G.?et?al.?2005，劉維瑜and金春蓮??2007、Hellani?A.?et?al.?2004?、Ballantyne?KN.?et?al.2007）。而殘缺的指紋則是犯罪現場較為常見的法醫物證，對這一樣品DNA的成功檢出可以極大地提高法醫物證DNA的檢出率。

痕量DNA的前期擴增能有效的提高的STR-DNA分型的成功率，為指證犯罪嫌疑人提供很大的幫助。

參考文獻：

[1]??Cheung?VG,Nelson?SF.?Whole?genome?amplification?using?a?degenerate?oligonucleotide?primer?allows?hundreds?of?genotypes?to?be?performed?on?less?than?one?nanogram?of?genomic?DNA.?Proc?Natl?Acad?Sci?U?S?A,?1996,?93(25):?14676-14679.

[2]??Hanson?EK,Ballantyne?J.?Whole?genome?amplification?strategy?for?forensic?genetic?analysis?using?single?or?few?cell?equivalents?of?genomic?DNA.?Anal?Biochem,?2005,?346(2):?246-257.

[3]??Marchio?A,?Terris?B,?Meddeb?M,?Pineau?P,?Duverger?A,?Tiollais?P,?Bernheim?A,Dejean?A.?Chromosomal?abnormalities?in?liver?cell?dysplasia?detected?by?comparative?genomic?hybridisation.?Mol?Pathol,?2001,?54(4):?270-274.