[發明專利]一種運用于法醫鑒定痕量DNA的預擴增方法

無效

• 申請號: 201210127726.2
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102634510A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 羅瑛;朱暉;唐文如;柳海濤;李安;史斌;蔡海強
• 申請（專利權）人: 昆明理工大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種運用于法醫鑒定痕量DNA預擴增方法，其特征在于按如下步驟進行：

（1）準備預擴增反應體系中各反應試劑，反應體系總體積為70-100?ul，反應體系包含?1×反應緩沖液、10-100pg痕量DNA模板、1-3uM?的primer1、1-3uM?的primer2、0.005-0.1μM?primer3-primer36的34個引物、4-8μl?的dNTP、2-4μl?的0.5%BSA和1-2uL的Phi29?DNA聚合酶，余量用雙蒸水補足；

首先將36種引物混合均勻，在混合溶液中加入7-10μl的10×反應緩沖液和10-100pg痕量DNA模板，用雙蒸水補足58-93ul；

（2）將步驟（1）中混合物置于PCR儀中98℃預變性5-10min；

（3）取出變性后溶液，在冰上放置10-20min，然后向其中加入dNTP4-8μl、0.5%BSA2-4μl、1-2uL?5000U的Phi29?DNA聚合酶，混勻后放回PCR儀中擴增，其中每種dNTP濃度為2.5mM，?PCR擴增條件為30-35℃擴增10-18h；65℃?10-30min；4℃∞；

（4）-20℃保存痕跡DNA預擴增后產物，備用。

2.根據權利要求1所述運用于法醫鑒定痕量DNA預擴增方法，其特征在于：?primer1-primer36的36種引物序列如SEQ?ID?NO.1-?SEQ?ID?NO.36所示序列。

3.根據權利要求1所述運用于法醫鑒定的痕量DNA擴增方法中所用試劑制成的痕量DNA預擴增試劑盒。