[發明專利]一種從雞血中提取大量高純度DNA的方法

無效

• 申請號: 201210126927.0
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102660537A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 苗永旺;霍金龍;劉麗仙;霍海龍
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及，尤其涉及的是一種從雞血中提取大量高純度DNA的方法。

背景技術

提取高質量、高濃度和高純度的基因組DNA是開展分子生物學實驗的重要技術步驟，從動物血液中提取基因組DNA，具有不殺死動物，經濟實用等優點。常規血液DNA的提取方法多采用苯酚氯仿法提取，這種方法具有耗時長、實驗試劑毒性大，操作復雜等缺點。而試劑盒提取費用相對較高，提取的DNA純度和濃度均低，只適合近期實驗的需要，提取的DNA量較少不利于多次反復使用；且由于提取量少，提取的DNA容易降解不易長期保存利用，時間稍長就不能進行下游PCR擴增反應。為了更有效、快速地提取高質量高濃度的雞血基因組DNA，在借鑒和改進前人工作的基礎上，研究建立了一種從雞血中快速大量提取高質量基因組DNA的方法，現將試驗過程報道如下。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對現有技術的不足提供一種從雞血中提取大量高純度DNA的方法。

本發明的技術方案如下：

一種從雞血中提取大量高純度DNA的方法，包括以下步驟：吸取100μl解凍的DNA保存液保存的雞血樣品100μl到含300μl試劑X的1.5ml離心管中；用移液槍反復垂懸，直到使原血樣變為澄清的液體狀；4000rpm離心5min，棄掉上清液；加入1ml的試劑Y，輕輕懸浮上一步離心后的沉淀物；加入5μl的Rnase?A，混勻后，37℃溫浴30min；加入250μl的5mol/L高氯酸鈉，手動振蕩混合10min；55℃水浴20min，期間每隔5min手工晃動一次；加入300μl預冷的三氯甲烷，混合5min；12000r/min離心5min，吸取上清到另一離心管中；加入等體積的異丙醇，緩慢搖動，即可見絮狀DNA；用預冷的75％乙醇洗滌2次，晾干，用適量的TE溶解，4℃存放一周，轉至-20℃長期保存；

所述的DNA保存液：TrisCl?3.03g，，Na2EDTA?9.31g，SDS?2.50g加水攪拌溶解，定容至250ml；

所述的試劑X配制方法：將1mol/LTrisCl(pH?8.0)，1mol/LMgCl₂，體積百分比10％的Triton?X-100按比例混合，再加入一定量的蔗糖，使混合液中各成分的終濃度為：10mmol/L?Tris·Cl；0.32mol/L蔗糖；5mmol/L?MgCl₂；1％Triton?X-100；然后用NaOH調整pH值至8.0，高壓滅菌；

所述的試劑Y配制方法：將1mol/LTrisCl、pH?8.0，0.5mol/LNa₂EDTA按比例混合，再加入一定量的NaCl固體和水，使混合液中各成分的終濃度為：400mmol/L?TrisCl；60mmol/L?Na₂EDTA；150mmol/L?NaCl。然后高壓滅菌。再加入一定量的10％SDS，使SDS在試劑Y混合液中的質量百分比濃度為1％。

采用上述方案提取DNA耗時較短、提取的DNA樣品純度高，A_260nm/A_280nm在1.696-1.857，濃度大(100μl雞血可提取46.317μg?DNA)、質量好，能完全滿足下游分子生物學實驗的要求。

附圖說明

圖1為2％瓊脂糖凝膠電泳檢測雞血中提取的基因組DNA結果。

具體實施方式

以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。

本發明的方法為一種快速、高效的從雞血中提取高純度、大濃度的基因組DNA的方法。

1、雞血樣品的制備

雞翅下靜脈采血后與等體積的DNA保存液(配方見主要試劑的配制部分)混勻，-20℃低溫保存。

2、提取DNA的主要試劑及配制

所用試劑為：TrisCl，Sucrose，MgCl₂，Triton?X-100，NaOH，Na₂EDTA，NaCl，SDS，NaClO₄·H₂O，RNaseA。

(1)DNA保存液：TrisCl?3.03g，，Na₂EDTA?9.31g，SDS?2.50g加水攪拌溶解，定容至250ml。

(2)1mol/LTrisCl：在800ml水中溶解121g?Tris堿，用濃鹽酸調pH值到8.0，加水至1L。