[發明專利]一種從雞血中提取大量高純度DNA的方法

無效

• 申請號: 201210126927.0
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102660537A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 苗永旺;霍金龍;劉麗仙;霍海龍
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種從雞血中提取大量高純度DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：吸取100μl解凍的DNA保存液保存的雞血樣品100μl到含300μl試劑X的1.5ml離心管中；用移液槍反復垂懸，直到使原血樣變為澄清的液體狀；4000rpm離心5min，棄掉上清液；加入1ml的試劑Y，輕輕懸浮上一步離心后的沉淀物；加入5μl的RnaseA，混勻后，37℃溫浴30min；加入250μl的5mol/L高氯酸鈉，手動振蕩混合10mm；55℃水浴20min，期間每隔5min手工晃動一次；加入300μl預冷的三氯甲烷，混合5min；12000r/min離心5min，吸取上清到另一離心管中；加入等體積的異丙醇，緩慢搖動，即可見絮狀DNA；用預冷的75％乙醇洗滌2次，晾干，用適量的TE溶解，4℃存放一周，轉至-20℃長期保存；

所述的DNA保存液：TrisCl?3.03g，，Na₂EDTA9.31g，SDS?2.50g加水攪拌溶解，定容至250ml；

所述的試劑X配制方法：將1mol/LTrisCl(pH?8.0)，1mol/LMgCl₂，體積百分比10％的Triton?X-100按比例混合，再加入一定量的蔗糖，使混合液中各成分的終濃度為：10mmol/L?Tris·Cl；0.32mol/L蔗糖；5mmol/L?MgCl₂；1％Triton?X-100；然后用NaOH調整pH值至8.0，高壓滅菌；

所述的試劑Y配制方法：將1mol/L?TrisCl、pH?8.0，0.5mol/L?Na2EDTA按比例混合，再加入一定量的NaCl固體和水，使混合液中各成分的終濃度為：400mmol/LTrisCl；60mmol/L?Na₂EDTA；150mmol/L?NaCl。然后高壓滅菌。再加入一定量的10％SDS，使SDS在試劑Y混合液中的質量百分比濃度為1％。