[發明專利]一種快速定量檢測土壤中有機磷農藥殘留的方法

有效

• 申請號: 201210126308.1
• 申請日: 2012-04-27
• 公開（公告）號: CN102628810A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 王繼雯;慕蘭;楊文玲;甄靜;謝寶恩;劉瑩瑩;李冠杰;周伏忠;陳國參
• 申請（專利權）人: 河南省科學院生物研究所有限責任公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種快速定量檢測土壤中有機磷農藥殘留的方法，其特征在于，包括步驟：

A、土壤樣品的處理，包括：(1)有機磷農藥污染土壤樣品的處理：將含有機磷農藥的風干土壤樣品充分研磨后，過100目篩，取一支干凈的試管，準確稱取0.50g土樣，加入2.5mL?pH8.0磷酸緩沖液在混合儀上充分混勻3-5min，為待檢土壤樣品懸液；(2)空白土壤樣品的處理：將不含農藥的土樣風干后，充分研磨后，過100目篩，準確稱取0.50g空白土樣，加入2.5mL?pH8.0磷酸緩沖液在混合儀上充分混勻3-5min，為待檢空白土樣懸液；

B、空白對照土樣的測試：將上述待檢空白土樣懸液，加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上，然后6000r/min離心5min，取上清，用分光光度計在412nm處測定反應前的吸光度值A₀，加入0.1mL底物搖勻，然后檢測、記錄反應后的吸光度值，并計算出反應前吸光度值與反應后的吸光度值的變化量ΔA₀；

C、標準曲線的制作：另取5支干凈的試管，按步驟A中空白土壤樣品處理的方法制備待檢空白土樣懸液，分別向其中加入有機磷農藥標品使其終濃度分別為0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分別加入0.1mL酶液和0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上，然后6000r/min離心5min，取上清，用分光光度計在412nm處測定反應前的吸光度值A₁，加入0.1mL底物后充分搖勻，然后檢測、記錄反應后的吸光度值，計算出反應前的吸光度值與反應后的吸光度值的變化量ΔA₁；然后將本步驟C中的前述過程重復做三次，并求得變化量ΔA₁的平均值，并計算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同濃度的有機磷農藥溶液對酶的抑制率，然后分別對有機磷農藥標準品的不同濃度取log₁₀，以對有機磷農藥標準品的不同濃度取log₁₀為底得到的對數值為橫坐標，以其抑制率為縱坐標，并作出標準曲線，求出該標準曲線的回歸方程；

D、有機磷農藥污染土樣的測定：取一支干凈的試管，按步驟A中污染土壤樣品處理的方法制備待檢土壤樣品懸液，再加入0.1mL酶液、0.1mL顯色劑，搖勻后于37℃放置15min以上，然后6000r/min離心5min，取上清，用分光光度計在412nm處測定反應前的吸光度值A₂，加入0.1mL底物后充分搖勻，然后檢測、記錄反應后的吸光度值，并計算出反應前吸光度值與反應后的吸光度值的變化量ΔA₂；然后將本步驟D中的前述過程重復做三次，并求得變化量ΔA₂的平均值，并計算出其抑制率，將該抑制率代入所述標準曲線的回歸方程，就可以計算出其農藥殘留。

2.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述步驟B重復同時做三次重復，并且ΔA₀應大于0.3。

3.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述0.02M?pH8.0磷酸緩沖液的配制方法為：分別稱取0.6785g十二水磷酸氫二鈉與0.0165g二水磷酸二氫鈉，用蒸餾水溶解，并定容至1000mL。

4.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述酶液為丁酰膽堿酯酶溶液。

5.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述顯色劑的配制方法為：

分別稱取80mg二硫代二硝基苯甲酸和7.8mg碳酸氫鈉，用緩沖溶液溶解，并定容至10mL后4℃冰箱保存。

6.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述底物為碘化硫代丁酸膽堿溶液，其配制方法為：稱取24mg碘化硫代丁酸膽堿，加入3.0mL蒸餾水，充分搖勻溶解后置4℃冰箱保存。

7.如權利要求1所述方法，其特征在于，所述抑制率(％)＝[(ΔA-ΔA₀)/ΔA₀]×100％，其中：公式中ΔA₀表示對照溶液反應前后的吸光度的變化量；ΔA表示樣品溶液反應前后的吸光度的變化量。