[發明專利]神經生長因子活性定量測定方法

有效

• 申請號: 201210125986.6
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN103376248A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 譚淑萍;蔣立新;周志文
• 申請（專利權）人: 舒泰神(北京)生物制藥股份有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京銀龍知識產權代理有限公司 11243
• 代理人: 鐘晶;於毓楨

1.一種神經生長因子活性定量測定方法，包括以下步驟：

1)將處于對數生長期的TF-1細胞用不含血清和重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子的基礎培養基洗滌后重懸，獲得TF-1細胞懸浮液；

2)向梯度稀釋的神經生長因子標準品和待測樣品中分別加入所述TF-1細胞懸浮液，37℃、5％CO₂孵育；然后分別加入指示劑，檢測吸光度/熒光值，繪制標準曲線；

3)通過標準曲線及樣品的吸光度/熒光值計算待測樣品的神經生長因子活性濃度。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述步驟1)中獲得的所述TF-1細胞懸浮液還經過在37℃、5％CO₂條件下培養18-20h的步驟。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述處于對數生長期的TF-1細胞通過在完全培養基中37℃、5％CO₂條件下培養獲得。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于所述完全培養基為含體積百分含量10％的胎牛血清以及10ng/ml重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子的RPMI?1640培養基。

5.根據權利要求1-4任一所述的方法，其特征在于所述神經生長因子為鼠神經生長因子或人神經生長因子或其突變體。

6.根據權利要求1-5任一所述的方法，其特征在于所述指示劑為MTT、MTS或AlamarBlue。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于加入所述指示劑后，在37℃孵育，然后激發光560nm/發射光590nm檢測熒光值。

8.根據權利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于所述TF-1細胞懸浮液的濃度為1.5～2.5×10⁵細胞/ml。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于所述TF-1細胞懸浮液的濃度為2×10⁵細胞/ml。

10.根據權利要求1-9中任一所述的方法，其特征在于所述梯度稀釋的待測樣品中神經生長因子活性濃度為5～20AU/ml。