[發(fā)明專利]苯妥因檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210125533.3
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN102636637A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;孟雷;蔡江麗
• 申請（專利權(quán)）人: 嘉興九七九生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535;G01N33/531
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及兩種苯妥因檢測方法，包括苯妥因均相酶免疫測定法與苯妥因酶聯(lián)免疫吸附測定法。?

背景技術(shù)

苯妥因(5，5-Diphenyl-2，4-imidazolidinedione)，其結(jié)構(gòu)式如式(II)所示。?

式(II)?

苯妥因是一種抗癲癇藥物、癲癇是一種常見的神經(jīng)系統(tǒng)疾病，也是我國神經(jīng)系統(tǒng)疾病中僅次于腦血管疾病的第二大頑癥。目前，抗癲癇類藥物仍然是控制癲癇發(fā)作的主要手段。傳統(tǒng)的抗癲癇類藥物苯妥因由于治療窗窄、個(gè)體差異大、療效和毒性反應(yīng)與血藥濃度密切相關(guān)，臨床醫(yī)生僅憑經(jīng)驗(yàn)給藥往往達(dá)不到有效血藥濃度。因此，苯妥因血藥濃度的監(jiān)測對癲癇的診斷和治療具有重要的臨床指導(dǎo)意義。?

利用抗苯妥因特異性抗體建立的免疫檢驗(yàn)方法已經(jīng)運(yùn)用于病人血液中苯妥?因的跟蹤和監(jiān)測。現(xiàn)有的抗苯妥因特異性抗體都是利用與苯妥因咪唑啉環(huán)上其中一個(gè)氨基偶聯(lián)的免疫原而獲得的(即苯妥因通過其氨基基團(tuán)與載體蛋白進(jìn)行偶聯(lián))(美國專利號5306617，美國專利號5747352)。但是通過這種衍生方法制備的抗體使咪唑啉環(huán)不能夠充分體現(xiàn)其整體免疫性，本發(fā)明獲得的抗體，以及利用此抗體開發(fā)的檢測方法特異性強(qiáng)，靈敏度高，能夠用于各種樣品中苯妥因濃度的檢測。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明就是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，采用苯妥因全新衍生物制備出的特異性抗體的免疫試劑及檢測方法彌補(bǔ)了上述這些缺點(diǎn)。?

本發(fā)明的目的之一在于提供一種苯妥因的均相酶免疫檢測方法(Homogeneous?Immunoassay)。?

本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種苯妥因的酶聯(lián)免疫吸附劑檢測方法(Enzyme?linked?Immunosorbent?Assay，ELISA)。?

本發(fā)明提供的兩種苯妥因檢測方法操作方便、特異性強(qiáng)、靈敏度高，克服了現(xiàn)有技術(shù)存在的檢測苯妥因方法特異性不強(qiáng)、靈敏度不高的缺陷。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：?

一種苯妥因的均相酶免疫檢驗(yàn)方法，使用苯妥因的均相酶免疫檢驗(yàn)試劑，該檢測試劑由抗苯妥因特異性抗體和苯妥因酶標(biāo)偶聯(lián)物組成，包括以下操作步驟：?

(1)采用全自動(dòng)生化分析儀，將待測樣本與苯妥因均相酶免疫檢驗(yàn)試劑分別放?入樣本倉和試劑倉；?

(2)按照表1進(jìn)行檢測項(xiàng)目參數(shù)設(shè)置；?

表1?苯妥因均相酶免疫檢驗(yàn)參數(shù)設(shè)置表?

(3)測定OD340nm的吸光值；?

(4)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線來定量樣本中的苯妥因濃度。?

以上操作(2)步驟還可以通過以下優(yōu)選方案進(jìn)行：?

苯妥因均相酶免疫檢驗(yàn)參數(shù)設(shè)置表?

所述抗苯妥因特異性抗體由苯妥因免疫原免疫動(dòng)物后生產(chǎn)得到。?

所述的苯妥因免疫原，結(jié)構(gòu)式如(I)所示：?

式(I)?

式中，R為連接基團(tuán)，載體具有免疫原性。?

R可以為-(CH₂)_n-COO-、-O-(CH₂)_n-COO-、-S-(CH₂)_n-COO-或-NH-(CH₂)_n-COO-等，n是1至20之間的整數(shù)。優(yōu)選R為-O-(CH₂)_n-COO-，n值為1至10。更優(yōu)選R為-O-(CH₂)₄-COO-。?

載體為具有免疫原性的物質(zhì)，常選用蛋白質(zhì)。優(yōu)選為血清蛋白，血藍(lán)蛋白和甲狀腺球蛋白。更優(yōu)選為牛血清蛋白。?

當(dāng)R為-O-(CH₂)₄-COO-時(shí)，該苯妥因免疫原的合成途徑和方法如下：?

1.苯妥因衍生物的合成?

(1)用50-200ml有機(jī)溶劑A溶解1.0-10.0g的羥基二苯酮和1.0-5.0g的碳酸鹽，得到溶液1；將1.0-10.0g的5-溴戊酸乙酯加入到溶液1中，反應(yīng)完成后用5-20ml的有機(jī)溶劑A溶解反應(yīng)物，經(jīng)有機(jī)溶劑B萃取、干燥、濃縮得到白色固體狀化學(xué)物3。?

(2)用50-200ml有機(jī)溶劑C溶解1.0-10.0g的化學(xué)物3，加入強(qiáng)堿溶液反應(yīng)，得到白色固體；將此白色固體經(jīng)有機(jī)溶劑C萃取、無機(jī)酸溶液酸化、干燥、濃縮、純化等步驟得到白色固體狀化學(xué)物4。?