[發明專利]苯妥因檢測方法

無效

• 申請號: 201210125533.3
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN102636637A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;孟雷;蔡江麗
• 申請（專利權）人: 嘉興九七九生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/535;G01N33/531
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1.一種苯妥因(5，5-Diphenyl-2，4-imidazolidinedione)的均相酶免疫檢測方法(Homogeneous?Immunoassay)，使用苯妥因的均相酶免疫檢驗試劑，該檢測試劑由苯妥因特異性抗體和苯妥因酶標偶聯物組成，包括以下操作步驟：

(1)采用全自動生化分析儀，將待測樣本與苯妥因檢測試劑分別放入樣本倉和試劑倉；

(2)按照下表進行檢測項目參數設置；

(3)測定OD340nm的吸光值；

(4)制作標準曲線來定量樣本中的苯妥因濃度；

上述操作步驟(2)還可以通過以下優選方案實現。

所述抗苯妥因特異性抗體由苯妥因免疫原免疫動物后生產得到，

所述的苯妥因免疫原，其結構式如式(I)所示：

式(I)

式中，R為連接基團，載體具有免疫原性。

R為-O-(CH₂)_n-COO-，-S-(CH₂)_n-COO-，-NH-(CH₂)_n-COO-或-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之間的整數。優選R為-O-(CH₂)_n-COO-，n值是1至10。更優選R為-O-(CH₂)₄-COO-；所述載體為具有免疫原性的物質，常選用蛋白質。優選為血清蛋白，血藍蛋白和甲狀腺球蛋白，更優選為牛血清蛋白。

苯妥因酶標偶聯物的制備方法如下：

(1)酶溶液制備：稱取酶，選自β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)或葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(Glucose-6-phosphate?Dehydrogenase，G6PDH)，優選G6PDH，在室溫條件下溶解于磷酸緩沖液中，終濃度為2-6mg/mL；

(2)用有機溶劑溶解鏈接R連接基團的苯妥因衍生物，使其終濃度為10-50mg/mL，通過三丁胺法進行活化，并與酶溶液進行交聯反應，經純化和透析后得到苯妥因酶標偶聯物，所述的有機溶劑選自DMF、DMSO、甲醇或乙醇，優選地，有機溶劑為DMF。

2.根據權利要求1所述的苯妥因的均相酶免疫檢測方法，其特征在于所述的檢測試劑制備方法包含以下步驟：

(1)將抗苯妥因特異性抗體以1∶1000-1∶10000的體積比稀釋到均相R1緩沖液中，均相R1緩沖液含50mM?Tris，0.25％牛血清蛋白，50mM葡萄糖-6-磷酸和50mM煙堿腺嘌呤二核苷酸；

(2)將苯妥因酶標偶聯物以1∶1000-1∶10000的體積比稀釋到R2緩沖液中，R2緩沖液含100mM?Tris，0.25％牛血清蛋白；

所述的抗苯妥因特異性抗體與R1緩沖液的體積比優選為1∶1000-1∶4000；

所述的苯妥因酶標偶聯物與R2緩沖液的體積比優選為1∶1000-1∶4000。