[發明專利]一種重組枯草芽孢桿菌免疫球蛋白結合蛋白功能域表達載體及其應用

無效

• 申請號: 201210125257.0
• 申請日: 2012-04-26
• 公開（公告）號: CN102676570A
• 公開（公告）日: 2012-09-19
• 發明（設計）人: 李志會;孟紅;李鵬;宋楠楠;岳盈盈
• 申請（專利權）人: 山東省醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C12N15/75
• 分類號: C12N15/75;C12N15/66;C12N1/21;C12P21/02;A61K39/39;C12R1/125
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發明涉及一種重組枯草芽孢桿菌免疫球蛋白結合蛋白功能域表達載體，其宿主細胞，及其制備方法與應用，屬于生物技術領域。?

背景技術

疫苗是控制由病原引起的疾病的重要環節，機體大部分的感染發生在粘膜或由粘膜入侵機體致病，因此，粘膜途徑是接種疫苗的一個良好選擇。痢疾菌苗經滴鼻途徑免疫小鼠能有效地激發鼻粘膜局部分泌抗原特異性IgA、IgG的升高，同時誘發遠離免疫誘導部位的胃腸粘膜和生殖道粘膜分泌抗原特異性IgA、IgG升高，并誘發血清中抗原特異性IgA、IgG升高，表明共同粘膜免疫系統的存在，同時說明鼻粘膜是一個敏感有效、簡便安全的免疫途徑。?

與其他佐劑相比細菌載體疫苗表現了眾多優點：1.模仿自然感染途徑，能夠保證大部分粘膜表面區域接觸疫苗，開發由sIgA介導的第一道防線；2.可以通過口服和鼻飼接種，方法簡便易行；3.細菌能使大量的樹突狀細胞(Dendritic?cells，DC)聚集，具有免疫佐劑的作用，不僅可以刺激機體的粘膜免疫而且可以刺激機體的全身免疫；4.誘導作用位點比較明確，安全可靠。菌體佐劑也有眾多研究報道[1]。與營養型菌體比較，芽孢具有自己獨特的優勢：1.芽孢表達體系穩定，能抵抗多種不良因素的影響；2.芽孢被用做人及動物的食物添加劑和多種胃腸道病癥的處方藥及非處方藥的成分，因此安全性好；3.當前已有芽孢為基礎的商業化產品，生產工藝成熟；4.大部分枯草芽孢桿菌芽孢衣蛋白，包括CotA，CotB，CotC，CotD，CotF無顯著的功能，缺乏其中任何一個都不會引起明顯的性狀改變[2]，因此有希望應用以上多個融合載體蛋白建立多價疫苗。Duc等[3]對枯草芽孢桿菌芽孢的免疫特性以及在細胞內的歸宿研究顯示：芽孢可誘導機體產生局部免疫和系統免疫反應，該課題組以CotB-TTFc重組芽孢口服、鼻腔免疫小鼠能產生特異性抗體。對口服免疫小鼠的抗體類型分析顯示，主要為IgG、IgA和IgM，其中IgG包括IgG1、IgG2a、IgG2b和IG3亞型，口服免疫后54d?IgG1和IgG2b亞型水平最高；而鼻腔免疫后抗體主要為IgG1、IgG2b和IgM，口服免疫后的小鼠可抵抗致死劑量破傷風毒素攻擊。Mauriello等[4]用CotC為融合表達載體蛋白展示了TTFC及LT，用其粘膜免疫小鼠也誘導了全身及粘膜特異性抗體，充分說明枯草芽孢桿菌芽孢是粘膜免疫的一個有效載體，并能成功的在其表面展示不同的抗原蛋白。并且有研究顯示，芽孢表面展示抗原比芽孢萌時展示的抗原誘導能力更加有效[5]。目前活菌疫苗載體的研究主要集中與在菌體表面展示抗原的細菌展示技術，一種細菌載體一般只展示一種抗原，因此，應用免?疫球蛋白結合蛋白(immunoglobulin(Ig)-bindingproteins，BPs)與IgG?Fc段結合的特性建立一種具有遞呈多種蛋白抗原能力的通用型菌體免疫佐劑對促進粘膜途徑疫苗的發展具有重要作用。因此本發明將葡萄球菌A蛋白(SPA)A結構域和鏈球菌G蛋白C1結構域融合表達展示在芽孢表面構建新型通用的粘膜免疫佐劑，將蛋白抗原結合到芽孢表面可用于接種方法中。?

1.Osorio?M，Wu?Y，Singh?S，et?al.Anthrax?protective?antigen?delivered?by?Salmonella?enterica?serovar?Typhi?Ty21a?protects?mice?from?a?lethal?anthrax?spore?challenge.Infect?Immun.2009，29.?

2.Adriano?O?H，Charles?P?M.Structure?and?assemblyof?the?bacterial?endospore?coat.Methods.2000，20(1)：95-110.?

3.Due?L?H，Hong?H?A，Uyen?N?Q，et?al.Intracellular?fate?and?immunogenicity?of?B.subtilis?spores.Vaccine.2004，22(15-16)：1873-1885.?

4.Mauriello?E?M，Duc?le?H，Isticato?R，et?al.Display?of?heterologous?antigens?on?the?Bacillus?subtilis?spore?coat?using?CotC?as?a?fusion?partner.Vaccine.2004，22(9-10)：1177-1187.?